藥物分析教案

天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院《藥品分析》第三章——藥品雜質(zhì)檢驗(yàn)TianjinMedicalUniversity第1頁第二節(jié)普通雜質(zhì)檢驗(yàn)方法第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢驗(yàn)方法第一節(jié)概述內(nèi)容：第2頁一、藥品純度要求1．藥品純度概念：

藥品純度是指藥品純凈程度藥品中雜質(zhì)是影響藥品純度主要原因2.藥品純度要求是不停提升

第一節(jié)概述第3頁3．藥品純度評價：應(yīng)把藥品性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢驗(yàn)、含量測定等作為一個有聯(lián)絡(luò)整體來評價藥品純度。純度檢驗(yàn)也稱為雜質(zhì)檢驗(yàn)

第4頁評價標(biāo)準(zhǔn)性狀：1.

結(jié)晶→粉末

2.

溶程變長

3.

顏色有異雜質(zhì)檢驗(yàn)→超標(biāo)含量測定→含量低第5頁二、雜質(zhì)起源與種類

雜質(zhì)概念

藥品中存在無治療用，影響藥品療效和穩(wěn)定性，甚至對人體健康有害物質(zhì)，稱為藥品雜質(zhì)。第6頁（一）雜質(zhì)起源

有兩個方面：在生產(chǎn)過程中引入在貯藏過程中引入1.

生產(chǎn)過程中引入雜質(zhì)主要指藥品在合成過程中，未反應(yīng)原料、中間體和副產(chǎn)物第7頁

生產(chǎn)過程中殘留有機(jī)溶劑、酸性或堿性雜質(zhì)檢驗(yàn)。

藥品中無效、低效異構(gòu)體或晶型檢驗(yàn)

比如：無味氯霉素存在A、B晶型，其中B為有效，A為低效。

第8頁主要指外界條件改變或微生物作用可能發(fā)生水解、氧化、潮解、溫度等改變，而產(chǎn)生相關(guān)雜質(zhì)。如：阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸；麻醉乙醚氧化為醛和有毒過氧化物

2.貯藏過程引入雜質(zhì)第9頁二、雜質(zhì)分類起源：普通雜質(zhì):含有普遍性特殊雜質(zhì):含有特殊性毒性：有毒雜質(zhì):嚴(yán)格控制信號雜質(zhì):監(jiān)測生產(chǎn)第10頁三、雜質(zhì)限量檢驗(yàn)

1．雜質(zhì)限量概念藥品中所含雜質(zhì)最大允許量，叫做雜質(zhì)限量。通慣用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。第11頁

3、雜質(zhì)限量檢驗(yàn)

指所檢驗(yàn)雜質(zhì)不得超出雜質(zhì)限量2、限量制訂考慮原因不得影響藥品質(zhì)量依據(jù)藥品用途制訂限量大小依據(jù)雜質(zhì)本身毒性大小制訂限量利于生產(chǎn)第12頁

4．雜質(zhì)限量計(jì)算

雜質(zhì)限量計(jì)算公式：

雜質(zhì)限量=雜質(zhì)最大允許量÷供試品量×100%標(biāo)準(zhǔn)液濃度×體積÷供試品量×100%

L（%）=C×V/S×100%第13頁

例1．葡萄糖中重金屬檢驗(yàn)：已知：S=4.0g；C=10μg/ml；L=5×10-6；求：V=？

解：V=L×S/C=5×10-6×4.0/10×10-6=2.0(ml)例2．葡萄糖中砷鹽檢驗(yàn)：已知：V=2.0ml；C=1μg/ml；L=0.0004%；求：S=？

解：S=C×V/L=1×10-6×2.0/4×10-6=0.5(g)第14頁

例3．磷酸可待因中嗎啡檢驗(yàn)：已知：V=5.0ml；C=0.02mg/ml；S=0.1g；求：L=？解：L=C×V/S=5.0×0.02/0.1×1000×100%=0.1%

注意

①單位一致②稀釋倍數(shù)③表示方法（%，mmp）第15頁第二節(jié)普通雜質(zhì)檢驗(yàn)方法一、氯化物檢驗(yàn)1．原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成氯化銀混濁液比較，以判斷供試品中氯化物是否超出限量。Cl-+Ag+AgCl第16頁2．條件：

[Cl-]0.05mg～0.08mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5ml～8ml。

酸度稀硝酸10ml/50ml。

溫度30～40℃

第17頁Cl-1濃度：50-80ug/50ml在硝酸酸性條件下在暗處放置5min注意第18頁

3．干擾排除

（1）供試品液混濁：可用含硝酸蒸餾水洗凈氯紙中氯化物后過濾來消除混濁對氯化物檢驗(yàn)干擾。

第19頁

（2）供試品有色：

采取內(nèi)消色法，按藥典附錄要求方法處理供試品+AgNO3放置10min澄清溶液+標(biāo)準(zhǔn)NaCl+水對照溶液供試品+AgNO3+水供試品溶液暗處放置5min后比較第20頁

（3）藥品與AgNO3反應(yīng)

例：1、碘化物中氯離子檢驗(yàn)2、巴比妥類藥品中氯離子檢驗(yàn)第21頁

二、硫酸鹽檢驗(yàn)法

1．原理

SO42-+Ba2+BaSO4稀HCl白色沉淀第22頁

2．條件：

[SO42-]0.1mg～0.5mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1～5ml酸度稀鹽酸2ml/50ml

3．干擾排除供試品有色：可采取內(nèi)消色法第23頁

（一）硫氰酸鹽法

1．原理

Fe3++6SCN-

{Fe(SCN)6-]3-

紅色

2．條件：[Fe3+]0.01mg～0.05mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1～5ml酸度稀鹽酸4ml/50ml

HCl

三、鐵鹽檢驗(yàn)法第24頁當(dāng)有Fe2+存在時，加氧化劑過硫酸銨氧化Fe2+成Fe3+

當(dāng)供試液管與對照溶液管色調(diào)不一致，或所呈硫氰酸鐵顏色較淺不便比較時，可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。3．干擾排除第25頁

2Fe3++2HSCH2COOH2Fe2++SCH2COOH+2H+

SCH2COOHFe2++2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COOH)2]2-+2H2O

2OH-(二）巰基醋酸法

1.原理巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨堿性試液中與Fe2+作用生成紅色配位離子第26頁

氨溶液提供堿性條件巰基醋酸使高鐵離子還原枸櫞酸作用是與鐵離子形成配位離子，預(yù)防產(chǎn)生氫氧化鐵沉淀2.說明第27頁四、重金屬檢驗(yàn)法

重金屬是指在試驗(yàn)條件下能有硫代乙酰胺或硫化鈉作用而顯色金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等定義：檢驗(yàn)時以鉛作為代表第28頁藥典收載了四種重金屬檢驗(yàn)法第二法熾灼破壞后硫代乙酰胺法第三法硫化鈉法；第四法微孔濾膜法第一法硫代乙酰胺法第29頁

1．原理

CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S合格＜H2S+Pb2+PbS+2H+

2．條件：[Pb2+]10μg～20μg/27ml,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液1～2ml。

酸度pH3.0～3.5.合格＜

pH3.5第30頁3．干擾排除

(1)供試品有色：可采取外消色法消除干擾。(2)供試品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氫析出硫，產(chǎn)生混濁影響比色，可加Vc或鹽酸羥胺使Fe3+氧化成Fe2+離子再檢驗(yàn)。

第31頁五、砷鹽檢驗(yàn)法

（一）古蔡法Gutzeit)(BP也采取此法）

1.原理As3++3Zn+3H+3Zn++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+3Zn++3H2O+AsH3

AsO43-+4Zn+11H+4Zn++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3(棕色)2As(HgBr)3+AsH33AsH(HgBr)2(黃色)

As(HgBr)3+AsH33HBr+As2Hg3(棕黑色)第32頁2.裝置與試劑作用

(1)驗(yàn)砷儀砷化氫發(fā)生瓶;中空磨口塞;導(dǎo)氣管(2)試劑作用合格＜①KI-SnCl2作用：交替還原作用；首先將AsO43-還原成AsO33-，生成碘再被還原成碘離子。第33頁

AsO43-+2I-+2H+

AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+

4I-+Zn2+[ZnI4]2-第34頁②Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-Sn齊，起去極化作用。③Pb(AC)2棉作用是消除供試品可能含有少許硫化物。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(AC)2PbS+2HAC

第35頁

3.干擾排除（1）供試品為S2-,SO32-,

S2O32-等:因在酸中生成H2S,SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢驗(yàn)。用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。（2）供試品為Fe3+能消耗KI，SnCl2

應(yīng)測定條件，先可加足量KI。第36頁

（3）含銻藥品銻鹽被還原為SbH3與HgBr2試紙作用，產(chǎn)生灰色銻斑，干擾砷斑檢驗(yàn)，可改用Betterdorff法（白田道夫法）第37頁（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸銀，USP采取此法)

1.原理：是利用砷化氫與Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中銀還原為紅色膠態(tài)銀，以Ag-DDC溶液為空白，于510nm波優(yōu)點(diǎn)，測定吸收度，供試品溶液吸收度不得大于標(biāo)準(zhǔn)砷溶液吸收度。

2.試劑作用：同古蔡法。第38頁六、溶液顏色檢驗(yàn)法溶液顏色檢驗(yàn)法是控制藥品中有色雜質(zhì)量方法。中國藥典（）收載有三種方法：K2Cr2O7黃、綠1.標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行比較方法標(biāo)準(zhǔn)比色液CoCl2橙黃,橙紅2.分光光度法CuSO4棕紅3.色差計(jì)法經(jīng)過測定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液或水之間色差值第39頁七、易炭化物檢驗(yàn)法是檢驗(yàn)藥品中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色微量有機(jī)雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，常采取與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色方法進(jìn)行檢驗(yàn)。(標(biāo)準(zhǔn)比色液為CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4)

第40頁

是檢驗(yàn)藥品中微量不溶性雜質(zhì)。常采取與濁度標(biāo)準(zhǔn)液比濁方法進(jìn)行檢驗(yàn)。濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備原理：(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O

甲醛腙白色混濁

不一樣級號濁度標(biāo)準(zhǔn)液級號0.51234濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml）2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0八、溶液澄清度檢驗(yàn)法第41頁九、熾灼殘?jiān)鼨z驗(yàn)法(residueonignition)BP稱硫酸灰分（sulphatedash)是檢驗(yàn)有機(jī)藥品中混入各種無機(jī)雜質(zhì)。常采取重量方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

殘?jiān)佰釄逯亍釄逯?/p>

殘?jiān)?=×100%

供試品重第42頁十、干燥失重檢驗(yàn)法

主要檢驗(yàn)藥品中水分及其它揮發(fā)性物質(zhì)。常采取重量方法進(jìn)行檢驗(yàn)。慣用方法有四種：（一）常壓恒溫干燥法

（二）干燥劑干燥法

（三）

減壓干燥法第43頁熱重分析法（四）熱分析法（thermoanalysis)

差示熱分析差示掃描量熱法

1.熱重分析法（thermogravimetricanalysis,

TGA)

在程序升溫下，測量物質(zhì)質(zhì)量與溫度關(guān)系，研究物質(zhì)在加熱同時失重情況下，所發(fā)生質(zhì)改變，慣用于藥品穩(wěn)定性研究；珍貴和易氧化藥品干燥失重測定。(長春堿)第44頁2.差示熱分析（differentialthermlanalysis,

DTA)

是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之間溫差與溫度關(guān)系一個技術(shù)。參比物是一個惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學(xué)改變。所以溫差(△T)只與被測物質(zhì)量質(zhì)改變相關(guān)。△T=0被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng);△T=-為吸熱峰;△T=+為放熱峰.第45頁測藥溶點(diǎn)

DTA在藥品分析中應(yīng)用尖峰為物理改變藥品定性分析寬峰為化學(xué)改變估測藥品純度第46頁

3.差示掃描量熱法(differentialscanningcalorimetry,DSC)

是在程序升溫下，測量維持樣品和參比物溫度相同，系統(tǒng)所需供給樣品隨溫差改變能量一個技術(shù)。DSC與DTA不一樣之

處是統(tǒng)計(jì)方式不一樣，是統(tǒng)計(jì)系統(tǒng)供給能量，吸熱供給能量；放熱降低供給能量。在藥品分析中應(yīng)用與DTA相同。DSC-TG常聯(lián)合用。第47頁十一、有機(jī)溶劑殘留量測定法主要檢驗(yàn)藥品在生產(chǎn)過程中引入有害有機(jī)溶劑(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等）。常采取氣相色譜法方法進(jìn)行檢驗(yàn)。慣用方法有二種：①直接進(jìn)樣法和②頂空進(jìn)樣法（試用于揮發(fā)性大樣品測定）。

色譜系統(tǒng)性試驗(yàn)要求：(1)N＞1000;(2)用內(nèi)標(biāo)法測定時，要求R＞1.5;(3)外標(biāo)法測定時，待測物峰面積RSD＜10%。第48頁殘留有機(jī)溶劑測定方法和限量有機(jī)溶劑柱溫（℃）內(nèi)標(biāo)物測定方法限量（%）二氧六環(huán)170吡啶1法0.038吡啶170二氧六環(huán)1法0.02苯170甲苯1法或2法0.0002甲苯170苯1法或2法0.089氯方140二氯甲烷1法或2法0.006二氯甲烷1401法或2法0.06環(huán)氧乙烷802法0.001返回第49頁第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢驗(yàn)方法

一、利用藥品和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上差異（一）臭味及揮發(fā)性質(zhì)差異比如：黃凡士林中異性有機(jī)物檢驗(yàn)：本品2.0g,直火加熱無辛味。濃過氧化氫中不揮發(fā)性雜質(zhì)檢驗(yàn)：10ml水浴蒸干殘?jiān)?5mg（二）顏色差異比如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物檢驗(yàn)：取本品2.0g，加NaOH試液10ml，加水25ml，與黃色3號比色液比，不得更深。第50頁（三）溶解行為差異比如：吡哌酸中堿中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）檢驗(yàn)（四）旋光性質(zhì)差異比如：硫酸阿托品中莨菪堿檢驗(yàn)：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4

第51頁

（五）對光吸收性質(zhì)差異1.紫外分光光度法：比如:地蒽酚中二羥基蒽醌檢驗(yàn)再如：苯丙醇中苯丙酮檢驗(yàn)：可利用供試液吸收度比來控制雜質(zhì);純品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%時A247nm/A258nm=0.79;

所以要求供試品A247nm/A258nm＜0.79;即所含苯丙酮＜0.5%.第52頁2.原子吸收分光光度法：是經(jīng)過測定藥品中所含待測元素原子蒸氣，吸收發(fā)自光源該元素特定波長程度，以求出藥品中待測元素含量。限量檢驗(yàn)時：對照品液=供試品+限量-----a

供試品液=------------------b

符合要求時b＜(a-b);b＞(a-b)不合格。第53頁3。紅外分光光度法：

主要用于藥品中無效或低效晶型檢驗(yàn)

如：甲苯咪唑中A晶型檢驗(yàn)第54頁

A晶型C晶型在640cm-1有強(qiáng)吸收吸收很弱在662cm-1吸收很弱有強(qiáng)吸收662cm-1640cm-1662cm-1640cm-1供試品+10%A晶型D2D1

供試品D2D1＜10%

R=D1/D2＞R’=D’1/D’2第55頁

4.熒光分析法

3,4-二去氫利血平利血平中氧化產(chǎn)物檢驗(yàn)：利血平(無熒光)(I)(黃綠色熒光)3,4,5,6-四去氫利血平(II)(藍(lán)色熒光)第56頁(六)吸附或分配性差異

1.薄層色譜法(TLC)

(1)雜質(zhì)對照品法比如:鹽酸左旋咪唑中檢驗(yàn)硅膠G2,3-二氫-6-苯基咪唑[2,1-b]噻唑鹽

苯:甲醇:冰HAC

樣品

對招品。·····第57頁

(2)高低濃度對比品法比如:鹽酸異丙嗪中相關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)

硅膠G

有多個雜質(zhì)而且結(jié)構(gòu)不清

樣品10mg/ml;對照品(1)0.15mg/ml己烷:丙酮:乙胺(2)0.05mg/ml

樣品液對(1)(2)

供試液雜質(zhì)斑點(diǎn)不多于3個;雜質(zhì)斑點(diǎn)與對照(2)主斑點(diǎn)比較,不得更深;如有一點(diǎn)超出,應(yīng)不深于對照液(2)主斑點(diǎn).......

....

...第58頁

2.紙層析法(PC)

慣用于極性大藥品分離、分析，如地高辛中相關(guān)雜質(zhì)檢驗(yàn)。第59頁3.高效液相色譜法(HPLC)（1）峰面積歸一化法：L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%比如：利巴韋林中相關(guān)雜質(zhì)檢驗(yàn)：對照品液(5μg/ml)進(jìn)樣10μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)滿量程20%～25%樣品液(0.4mg/ml)進(jìn)樣10μl,雜質(zhì)∑Ai＜(∑Ai+A主）1.0%第60頁（2）不加校正因子主成份對照法

對照品液為供試品稀釋液進(jìn)樣測得A主

供試品液進(jìn)樣測得∑Ai

其∑Ai＜A主即為合格.

比如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:對照品液(0.01mg/ml)進(jìn)樣20μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)10%～30%樣品液(0.14mg/ml)進(jìn)樣20μl,雜質(zhì)∑Ai＜A主1.0%.第61頁

（3）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中雜質(zhì)含量

對照品+內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR)

供試品+內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣求AX.AS,則雜質(zhì)濃度CX=f×AX/(AS/CS)第62頁

4.氣相色譜法(GC)

主要用于藥品中揮發(fā)性雜質(zhì)檢驗(yàn)，其檢驗(yàn)方法與HPLC法相同。第63頁二、利用藥品和雜質(zhì)在化學(xué)性上差異（一）酸堿性差異

1.要求消耗滴定液體積

比如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢驗(yàn)：(NaOH0.02mol/L)取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚藍(lán)微藍(lán)色＜0.50ml2.pH法

比如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸檢驗(yàn)：0.01g/mlpH3.0～4.5.3.指示劑法

比如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢驗(yàn)：其水溶液不得使甲基橙顯紅色。第64頁（二）氧化還原性差異比如：NaCl中I-和Br-檢驗(yàn)EOCl/2Cl-=+1.3595V＞EOBr/2Br-=+1.065V

＞EOI/2I-=+0.5345V,所以+NaNO2+H2SO4+淀粉顯藍(lán)色

再比如：鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡檢驗(yàn)：后者可被碘氧化生成水溶性綠色化合物。所以ChP要求：本品50mg+4mlH2O+1dI2+5ml乙醚乙醚層不得顯紅色；水層不得顯綠色。第65頁（三）雜質(zhì)