沙門氏菌和志賀氏菌檢測操作程序

沙門氏菌和志賀氏菌檢測操作程序范圍本程序規定了糞便標本中沙門氏菌（Salmonella）和志賀氏菌（Shigella）的檢驗方法。檢驗程序沙門氏菌和志賀氏菌檢驗程序見圖1。36℃36℃±1℃，18h糞便或肛拭子挑取3個或以上可疑菌落，接種于5％羊血瓊脂平板報告進行系統生化鑒定、血清學試驗TSI，賴氨酸，MIO，西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂，尿素SBG增菌液XLD和MAC36℃±1℃，18h36℃±1℃，18h直接科瑪嘉沙門顯色培養基TSI:K/Ag++賴氨酸:+MIO:+/-/+檸檬酸鹽:+尿素:-TSI:K/Atr賴氨酸:+MIO:+/-/-檸檬酸鹽:-尿素:-TSI:K/Ag賴氨酸:-MIO:+/-/+檸檬酸鹽:-尿素:-TSI:K/A賴氨酸:-MIO:-/V/-檸檬酸鹽:-尿素:-反應結果與左側描述不符TSI:K/A賴氨酸:-MIO:-/-/+檸檬酸鹽:-尿素:-沙門氏菌屬傷寒沙門氏菌甲型副傷寒沙門氏菌志賀氏菌屬宋內志賀氏菌可能是腸道菌群，或者需要額外試驗以排除其他致病菌或生化不典型的沙門氏菌或志賀氏菌分離株36℃±1℃，18h操作步驟標本收集標本包括新鮮的或轉移至Cary-Blair運送培養基的糞便或肛拭子。最優標本是轉移至Cary-Blair運送培養基的糞便拭子。肛拭子不是最佳標本，僅在病人無糞便標本時采用。肛拭子收集后應當目測，需要在拭子上明顯見到糞便。所采集的標本盡快檢驗，放入Cary-Blair運送培養基中的標本應在冷藏條件下24h內送檢。新鮮的糞便標本置于清潔、干燥、無肥皂或消毒液殘留的容器中，冷藏條件下8h內送檢。分離培養直接分離培養新鮮糞便：無菌拭子采集少量糞便，盡量從可見血或黏液的部位收集；新鮮拭子在XLD和MAC一區劃線；以1μL無菌接種環或接種針劃線分離。在標本中再插入一個清潔的無菌拭子，將拭子放入SBG增菌液。輕擰管蓋。注意：拭子表面有一層標本即可，不可將過量的標本放入SBG增菌液。肛拭子：操作程序同新鮮糞便。轉移至Cary-Blair運送培養基的糞便拭子：輕攪混合標本；拭子在XLD和MAC一區劃線；以1μL無菌接種環或接種針劃線分離；在標本中再插入一個清潔的無菌拭子，將拭子放入SBG增菌液。輕擰管蓋。注意：拭子表面有一層標本即可，不可將過量的標本放入SBG增菌液。平板36℃1℃增菌培養增菌液于36℃1℃培養18h～24h，采用上述方法于科瑪嘉沙門氏菌顯色平板上劃線分離，36℃菌落特征選擇性平板上可疑菌落的特征見表1。沙門氏菌屬和志賀氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌（大多數）傷寒沙門氏菌志賀氏菌屬MAC瓊脂菌落光滑、無色，直徑2mm～3mmXLD瓊脂菌落呈紅色，直徑2mm～4mm科瑪嘉顯色培養基紫色或酒紅色紫色或酒紅色純培養挑取3個或以上可疑菌落，劃線接種5%羊血瓊脂平板，36℃±1℃初步鑒定可疑菌落接種TSI瓊脂，賴氨酸脫羧酶培養基、動力-靛基質-鳥氨酸瓊脂（MIO）、西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂和尿素瓊脂。沙門氏菌屬和志賀氏菌屬生化反應初步鑒別見表2。沙門氏菌屬和志賀氏菌屬生化反應初步鑒別表項目沙門氏菌（大多數）傷寒沙門氏菌甲型副傷寒沙門氏菌志賀氏菌屬TSI（斜面）KKKKTSI（底層）AAAATSI（產氣）＋－＋＋TSI（硫化氫）＋少量－－賴氨酸＋＋－－MIO（動力）＋＋＋－MIO（靛基質）－－－可變MIO（鳥氨酸）＋＋＋痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌：－宋內志賀氏菌：＋檸檬酸鹽（西蒙氏）＋－－－尿素－－－－血清學鑒定挑取5%羊血瓊脂平板上的菌落，進行沙門氏菌和志賀氏菌的血清學鑒定，設鹽水對照。確定鑒定刮取5%羊血瓊脂平板上的單個菌落，進行系統生化鑒定。結果與報告報告糞便標本中檢出沙門氏菌或志賀氏菌。菌株的保存和上送培養物穿刺接種半固體培養基，輕擰管蓋，36