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DB34DB34/T3305—2018石榴干腐病檢測與鑒定技術規程DetectionandIdentificationofPilidiellagranati2018-12-29發布2019-01-29實施安徽省市場監督管理局發布I1GB/T6682分析實驗室用水規分類地位：屬真菌界Fungi，子囊菌門Ascomycota，子囊菌綱Sordariomycetes，間座殼目5.1高速離心機：轉速≤15000r/5.5恒溫培養箱：20℃~30℃5.7恒溫水浴鍋：4℃~100℃25.14顯微鏡：物鏡頭10×~40×6.1PCR試劑：2×PCRTaqMa異戊醇（25：24：1氯仿，異丙醇，TE（Tris-HCL10mmol/L，EDTA1mmol/L，pH8.0）基中培養。待長出菌絲后，轉至PDA培養基平板和孢子形態（參見附錄A.3）。進行單孢分離與純化后從培養好的菌落邊緣用打孔器取10塊直徑為養5d，過濾收集菌絲，經液氮冷凍研磨成粉，加），將上清轉移至新的EP管中，加入等體積氯仿，輕輕顛倒混勻，常溫條件下12000rpm離心5min；者TE（pH8.0）溶解沉淀（含20），——GF-F：5’-AAGGACACAACCCCAGATAC-3’；——GF-R：5’-ATAAACTACTACGCTCAGAG-3’。3膠在1×TAE緩沖液中電泳，用凝膠成像系統分析。若陽性對照出現一條450bp的DNA片段，陰性分離并鑒定為石榴干腐病菌的菌株，應妥善保存。短期保存可將菌株接種到PDA培4

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