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文檔簡介

2025-2026學(xué)年吉林省遼源市高三六校第一次聯(lián)考生物試卷注意事項:1.答題前,考生先將自己的姓名、準(zhǔn)考證號碼填寫清楚,將條形碼準(zhǔn)確粘貼在條形碼區(qū)域內(nèi)。2.答題時請按要求用筆。3.請按照題號順序在答題卡各題目的答題區(qū)域內(nèi)作答,超出答題區(qū)域書寫的答案無效;在草稿紙、試卷上答題無效。4.作圖可先使用鉛筆畫出,確定后必須用黑色字跡的簽字筆描黑。5.保持卡面清潔,不要折暴、不要弄破、弄皺,不準(zhǔn)使用涂改液、修正帶、刮紙刀。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1.群落最小面積是指基本上能夠表現(xiàn)出群落中所有植物種類的樣方的最小面積。調(diào)查群落豐富度時,通過改變樣方大小確定群落最小面積,進(jìn)而判斷群落類型,是研究群落的常用方法。如圖為三類群落物種數(shù)目的調(diào)查結(jié)果,下列說法正確的是()A.群落豐富度隨樣方面積的增大而不斷增大B.調(diào)查土壤小動物類群豐富度宜用標(biāo)志重捕法C.群落最小面積越大的群落,豐富度往往也越大D.宜選用50x50m2群落最小面積調(diào)查常綠闊葉林的豐富度2.如圖為某反射弧的部分結(jié)構(gòu)示意圖,虛線內(nèi)代表神經(jīng)中樞,下列敘述正確的是()A.a(chǎn)端與效應(yīng)器相連接,b端與感受器相連B.c處的液體是組織液,其理化性質(zhì)的改變會影響興奮的傳遞C.在d、e點(diǎn)之間連接了靈敏電流計,刺激F點(diǎn)和G點(diǎn)都能使電流計發(fā)生相同的偏轉(zhuǎn)D.把某藥物放在c處,刺激e點(diǎn),d處無電位變化,說明該藥物能阻斷神經(jīng)元之間的興奮傳遞3.下列關(guān)于人類遺傳病的敘述,正確的是()A.遺傳病患者都攜帶致病基因,且性狀與性別相關(guān)聯(lián)時一定是伴性遺傳B.X連鎖隱性遺傳病的特點(diǎn)是致病基因的頻率男性明顯高于女性C.基因突變引起的遺傳病一定不能利用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測D.遺傳病是指生殖細(xì)胞或受精卵里的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而引發(fā)的疾病4.多酶片是一種促消化的藥品,主要成分是胰蛋白酶、胃蛋白酶。多酶片還具有分解脂質(zhì)的功效,加速膽固醇的酯化從而降低血液中的膽固醇含量。下列說法合理的是()A.多酶片應(yīng)整顆服用,防止唾液淀粉酶對多酶片水解B.胃蛋白酶在腸道中把蛋白質(zhì)水解成多肽C.膽固醇是動物細(xì)胞膜的重要成分之一D.人體小腸黏膜可通過主動運(yùn)輸?shù)姆绞轿找鹊鞍酌?.2020年初,新型冠狀病毒肺炎爆發(fā),全國人民眾志成城,抗擊疫情。該病毒是一種致病性、傳染性很強(qiáng)的單鏈RNA病毒,下列相關(guān)敘述正確的是()A.新型冠狀病毒可以獨(dú)立完成各項生命活動B.新型冠狀病毒只有基因突變這一種可遺傳變異C.可將其接種在營養(yǎng)物質(zhì)全面的培養(yǎng)基上獲得子代D.細(xì)胞由于感染病毒而裂解死亡的過程屬于細(xì)胞凋亡6.在農(nóng)作物育種上,采用的方法有:誘變育種、雜交育種、多倍體育種、單倍體育種。它們的理論依據(jù)依次是()。①基因突變②基因連鎖③基因重組④染色體變異A.①③④④B.④③①②C.②④①③D.②①④③7.葉綠體中的色素為脂溶性,液泡中紫紅色的花青苷為水溶性。以月季成熟的紫紅色葉片為材料,下列實驗無法達(dá)到目的的是A.用無水乙醇提取葉綠體中的色素B.用水做層析液觀察花青苷的色素帶C.用質(zhì)壁分離和復(fù)原實驗探究細(xì)胞的失水與吸水D.用光學(xué)顯微鏡觀察表皮細(xì)胞染色體的形態(tài)和數(shù)目8.(10分)果蠅體內(nèi)的一個細(xì)胞在分裂過程中,一段時期內(nèi)某種物質(zhì)或結(jié)構(gòu)的數(shù)量變化如下圖。下列敘述正確的是A.若a代表2個染色體組,則該細(xì)胞正在進(jìn)行減數(shù)分裂B.若a代表4個核DNA分子,則該細(xì)胞正在進(jìn)行有絲分裂C.若a代表4條染色體,則該細(xì)胞在CD段不能形成四分體D.若a代表8條染色單體,則該細(xì)胞在CD段可發(fā)生基因重組二、非選擇題9.(10分)為了探究兩個水稻新育品種P1、P2幼苗的光合作用特性,科研人員分別測定了新育品種與原品種葉片的表觀光合速率,結(jié)果如圖所示。請回答下列問題:(1)水稻光合作用中捕獲光能的物質(zhì)分布在葉綠體的________________中,提取該物質(zhì)常用的有機(jī)溶劑是________________。(2)水稻葉肉細(xì)胞中,光反應(yīng)產(chǎn)生的________________是碳反應(yīng)中將CO2還原為糖的能源物質(zhì)。碳反應(yīng)中形成的第一個糖是________________。(3)假如白天突然中斷了CO2的供應(yīng),水稻葉綠體內(nèi)首先積累起來的物質(zhì)是________________。(4)在25℃-40℃范圍內(nèi),P1表觀光合速率受溫度影響比P2________________。(5)比較15℃時P1總光合作用強(qiáng)度和P2總光合作用強(qiáng)度的大小關(guān)系:________________(相等、不相等、無法確定),理由是:________________。10.(14分)人絨毛膜促性腺激素(HCG)是妊娠后胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白,制備抗HCG單克隆抗體可用于檢測早孕。圖甲是抗HCG單克隆抗體的制備流程示意圖,其中X、Y表示細(xì)胞,a~f表示操作過程。圖乙是醫(yī)學(xué)上定量檢測抗原的雙抗體夾心法原理示意圖,需先將抗體固定并與受檢抗原結(jié)合形成復(fù)合物,再加酶標(biāo)抗體和底物,加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢抗原的量直接相關(guān),根據(jù)顏色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。回答下列問題。(1)a過程中培養(yǎng)的Y細(xì)胞是____________,b過程中常用____________,____________,____________等方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合,d所示操作的目的是____________。(2)e過程培養(yǎng)的細(xì)胞,首先應(yīng)保證其處于________________的環(huán)境,其次還需要提供充足的營養(yǎng)等條件,其中加動物血清的目的是____________。(3)用雙抗體夾心法檢測抗原數(shù)量,酶標(biāo)抗體的作用是____________和____________。若現(xiàn)有三種抗HCG單克隆抗體,分別記為A、B、C。為檢測它們之中哪兩種適合用于雙抗體夾心法,科研人員需要進(jìn)行____________組實驗,檢測并比較各組實驗的產(chǎn)物量,以便得出結(jié)論。11.(14分)蜘蛛絲是自然界中機(jī)械性能最好的天然蛋白纖維,其強(qiáng)度高于制作防彈衣的凱夫拉纖維,有廣泛的應(yīng)用前景,但如何大量獲取蜘蛛絲纖維的問題一直未解決。近期,中國科學(xué)家利用基因工程技術(shù)成功的在家蠶絲腺細(xì)胞中大量表達(dá)蜘蛛絲蛋白。(1)在轉(zhuǎn)基因過程中,若利用圖所示質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體,需要用_____________酶來切割目的基因,該切割方法的優(yōu)點(diǎn)是_____________________________________________(答出一點(diǎn)即可)。(2)為獲取大量的蜘蛛絲基因,常采用_______________技術(shù)對該基因進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增蜘蛛絲基因前,需根據(jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計__________種引物。進(jìn)行擴(kuò)增時需先加熱至90~95℃,加入引物后冷卻至55~60℃,以上調(diào)控溫度操作的目的是____________________。(3)載體中的啟動子是____________酶的識別結(jié)合位點(diǎn),以便于驅(qū)動遺傳信息的表達(dá)過程;而載體本身的擴(kuò)增,需借助于載體上的_________________;載體上的標(biāo)記基因的作用是_____________________________。(4)研究人員發(fā)現(xiàn)若將蛛絲蛋白31號位的色氨酸替換為酪氨酸,蛛絲韌性可提高50%,這項成果用到的生物工程技術(shù)為____________________________。12.若昆蟲(XY型性別決定)的眼色為紅眼和白眼(由等位基因R/r控制),翅型為長翅和殘翅(由等位基因B/b控制),翅色為熒光翅和暗色翅(由等位基因A/a控制)。現(xiàn)提供各種表現(xiàn)型的純合個體,用于研究這三對基因的傳遞規(guī)律。某同學(xué)利用兩純合個體雜交得到F1,再將F1相互交配得到F2。下表為該同學(xué)對F2的部分統(tǒng)計結(jié)果。回答下列問題。表現(xiàn)型熒光翅暗色翅紅眼長翅紅眼殘翅白眼長翅白眼殘翅雌性5921611900雄性612029113110(1)根據(jù)該同學(xué)的統(tǒng)計結(jié)果可知,等位基因A/a位于常染色體上,作出此判斷的依據(jù)是__________。(2)根據(jù)該同學(xué)的統(tǒng)計結(jié)果不能判斷A/a、B/b這兩對等位基因是否位于非同源染色體上,還需進(jìn)行表現(xiàn)型為_______的數(shù)據(jù)統(tǒng)計才可作出判斷。(3)根據(jù)該同學(xué)的統(tǒng)計結(jié)果,無法判斷出等位基因R/r是只位于X染色體上還是位于X和Y染色體的同源區(qū)段上,原因是____。請從題干提供的材料中,選擇適合的材料,設(shè)計一個雜交實驗來證明等位基因R/r只位于x染色體上_______。(簡要寫出實驗思路、結(jié)果)

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、C【解析】

1、物種豐富度:指一個群落或環(huán)境中物種數(shù)目的多寡。2、一般調(diào)查植物和個體小、活動能力小的動物以及蟲卵的種群密度常用的是樣方法,其步驟是確定調(diào)查對象→選取樣方→計數(shù)→計算種群密度。標(biāo)記重捕法適用于調(diào)查活動能力強(qiáng)、活動范圍大的動物。【詳解】A、在一定范圍內(nèi),群落豐富度隨樣方面積的增大而不斷增大,超過一定樣方面積后,豐富度不再增加,A錯誤;B、統(tǒng)計熱帶雨林土壤中小動物豐富度用取樣器取樣法,不宜用標(biāo)志重捕法,B錯誤;C、據(jù)圖分析可知,群落最小面積越大的群落,豐富度往往也越大,C正確;D、宜選用20×20m2群落最小面積調(diào)查常綠闊葉林的豐富度,D錯誤。故選C。2、B【解析】

分析題圖,該圖的神經(jīng)傳導(dǎo)方向應(yīng)該是a→d→c→e,所以a連接感受器,c連接效應(yīng)器。【詳解】A.分析反射弧的結(jié)構(gòu)示意圖可知,a連接感受器,c連接效應(yīng)器,A錯誤;B.c處為組織液,如果理化性質(zhì)改變很容易影響神經(jīng)遞質(zhì)在兩神經(jīng)間的傳遞,B正確;C.在d、e點(diǎn)之間連接了靈敏電流計,神經(jīng)沖動只能由d點(diǎn)傳到e,刺激F點(diǎn),神經(jīng)沖動先傳至d,再傳至e,故電流計會有2次偏轉(zhuǎn),刺激G點(diǎn)神經(jīng)沖動只能傳至e,故電流計會有1次偏轉(zhuǎn),故電流計的偏轉(zhuǎn)不相同,C錯誤;D.神經(jīng)沖動是單向傳導(dǎo)的,只能由d點(diǎn)傳到e,所以即使不放藥物,刺激e點(diǎn)d點(diǎn)也不會有電位變化,D錯誤。3、D【解析】

由于生殖細(xì)胞或受精卵里的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,從而使發(fā)育成的個體患疾病,這類疾病都稱為遺傳性疾病,簡稱遺傳病。根據(jù)目前人們對遺傳物質(zhì)的認(rèn)識,可以將遺傳病分為單基因遺傳病,多基因遺傳病和染色體病三類。單基因遺傳病是由染色體上單個基因的異常所引起的疾病,多基因遺傳病是指涉及許多個基因和許多環(huán)境因素的疾病,染色體異常遺傳病是指由于染色體的數(shù)目形態(tài)或結(jié)構(gòu)異常引起的疾病。【詳解】A、染色體異常遺傳病患者由于染色體異常而患病,不攜帶致病基因,性狀與性別相關(guān)聯(lián)時不一定是伴性遺傳,如禿頂(從性遺傳),對于雜合子(Bb),是男性表現(xiàn)為禿頂,女性正常,B、b基因位于常染色體上,造成這種差異的原因是由于兩性體內(nèi)性激素的不同,A錯誤;B、X連鎖隱性遺傳病的特點(diǎn)是人群中男性患者遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于女性患者,致病基因的頻率男性與女性相等,B錯誤;C、基因突變引起的遺傳病如鐮刀型貧血癥,可以利用光學(xué)顯微鏡觀察紅細(xì)胞的形態(tài),正常人的紅細(xì)胞呈圓盤形,貧血癥患者的紅細(xì)胞呈鐮刀型,C錯誤;D、遺傳病是指生殖細(xì)胞或受精卵里的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而引發(fā)的疾病,D正確。故選D。4、C【解析】

“多酶片”的雙層結(jié)構(gòu)應(yīng)是依據(jù)“藥物先進(jìn)入胃,然后才進(jìn)入小腸”來設(shè)計的,外層含有胃蛋白酶,內(nèi)層含有胰蛋白酶、胰淀粉酶等,使其中各種酶能緩慢地釋放出來發(fā)揮作用。據(jù)此分析解答。【詳解】A.多酶片應(yīng)整顆服用,防止胃酸對多酶片的破壞,A錯誤;B.胃蛋白酶在胃中把蛋白質(zhì)水解成多肽,B錯誤;C.膽固醇是動物細(xì)胞膜的重要成分之一,C正確;D.胰蛋白酶屬于大分子物質(zhì),不可通過主動運(yùn)輸?shù)姆绞轿眨珼錯誤。故選C。5、B【解析】

病毒屬于非細(xì)胞生物,其包含蛋白質(zhì)和核酸兩種成分,并且只能寄生在活細(xì)胞才能進(jìn)行繁殖和代謝。【詳解】A、病毒沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu),不能獨(dú)立的完成各項生命活動,A錯誤;B、病毒沒有染色體,也不能進(jìn)行減數(shù)分裂,因此只有基因突變一種可遺傳的變異類型,B正確;C、病毒必須寄生在活細(xì)胞中培養(yǎng),不能在培養(yǎng)基上培養(yǎng),C錯誤;D、細(xì)胞僅由于病毒的感染而裂解死亡是生物因素導(dǎo)致的細(xì)胞代謝中斷死亡,不屬于細(xì)胞凋亡,D錯誤。故選B。6、A【解析】

各種育種方法的比較:雜交育種誘變育種多倍體育種單倍體育種處理雜交→自交→選優(yōu)→自交用射線、激光、化學(xué)藥物處理用秋水仙素處理萌發(fā)后的種子或幼苗花藥離體培養(yǎng)原理基因重組,組合優(yōu)良性狀人工誘發(fā)基因突變破壞紡錘體的形成,使染色體數(shù)目加倍誘導(dǎo)花粉直接發(fā)育,再用秋水仙素優(yōu)缺點(diǎn)方法簡單,可預(yù)見強(qiáng),但周期長加速育種,改良性狀,但有利個體不多,需大量處理器官大,營養(yǎng)物質(zhì)含量高,但發(fā)育延遲,結(jié)實率低縮短育種年限,但方法復(fù)雜,成活率較低例子水稻的育種高產(chǎn)量青霉素菌株無子西瓜抗病植株的育成【詳解】誘變育種、雜交育種、多倍體育種、單倍體育種的育種原理分別是基因突變、基因重組、染色體變異(以染色體組的形式成倍增加)、染色體變異(以染色體組的形式成倍減少),即①③④④,A正確,BCD錯誤。故選A。了解誘變育種、雜交育種、多倍體育種、單倍體育種的育種原理便可解答本題。7、D【解析】

A、由于葉綠體中色素為脂溶性,可用無水乙醇提取,A正確;B、花青苷為水溶性,可用水做層析液,B正確;C、月季成熟的紫紅色葉片含有紫紅色的大液泡,可發(fā)生質(zhì)壁分離和復(fù)原,則可用質(zhì)壁分離和復(fù)原實驗探究細(xì)胞的失水與吸水,C正確;D、表皮細(xì)胞高度分化,不能分裂,不能用光學(xué)顯微鏡觀察其染色體的形態(tài)和數(shù)目,D錯誤。故選D。【定位】色素,提取,質(zhì)壁分離和復(fù)原本題主要考查色素提取和分離以及質(zhì)壁分離和復(fù)原的知識。要求學(xué)生結(jié)合題干信息脂溶性和水溶性來判斷色素的提取和分離方法。8、D【解析】

根據(jù)圖文分析:圖中表示在果蠅細(xì)胞分裂過程(包括有絲分裂和減數(shù)分裂)中,物質(zhì)含量減半的過程;無論DNA、染色體、還是染色體組,減半發(fā)生的時期都為細(xì)胞分裂完成時,故著重分析有絲分裂末期、減數(shù)第一次分裂末期以及減數(shù)第二次分裂末期,各物質(zhì)的變化特點(diǎn)。【詳解】A、若a代表2個染色體組,則該細(xì)胞正在進(jìn)行有絲分裂末期,A錯誤;B、若a代表4個核DNA分子,則該細(xì)胞正在進(jìn)行減數(shù)第二次分裂末期,B錯誤;C、若a代表4條染色體,則該細(xì)胞正在進(jìn)行件數(shù)第一次分裂末期或減數(shù)第二次分裂末期,而四分體時期是減數(shù)第一次分裂前期,C錯誤;D、若a代表8條染色體單體,則CD段為減數(shù)第一次分裂整個過程,基因重組發(fā)生在減數(shù)第一次分裂前期或后期,故D正確。故選D。基因重組的兩種情況:減數(shù)第一次分裂前期:交叉互換;減數(shù)第一次分裂后期:非同源染色體自由組合。二、非選擇題9、類囊體膜(光合膜)95%乙醇(無水乙醇)ATP、NADPH三碳糖(三碳糖磷酸)RuBP(核酮糖二磷酸)大無法確定P1和P2在15℃時凈光合速率相同,但二者在該溫度下呼吸速率不確定【解析】

據(jù)圖分析:隨著溫度的升高P1和P2的凈光合速率都先上升后下降,且最適宜溫度都是25℃;凈光合速率P1高于P2,且兩者都高于對照組,但是溫度較高時P1下降的更快。【詳解】(1)捕獲光能的物質(zhì)是光合色素,分布在類囊體膜中,可溶于有機(jī)溶劑,用95%乙醇或無水乙醇進(jìn)行提取。(2)光反應(yīng)產(chǎn)生的ATP、NADPH都是能源物質(zhì)。三碳糖是碳反應(yīng)形成的第一個糖。(3)消耗RuBP的CO2固定過程立即停止,而生成RuBP的三碳酸還原過程繼續(xù),故RuBP首先積累起來。(4)在25℃-40℃范圍內(nèi),隨著溫度升高,P1凈光合速率下降的幅度更大,故P1凈光合速率受溫度影響比P2大。(5)P1和P2在15℃時凈光合速率相同,但二者在該溫度下呼吸速率不確定,故總光合作用強(qiáng)度無法判斷大小。本題主要考查了表觀光合和呼吸作用的相關(guān)知識,意在考查理解所學(xué)知識的要點(diǎn),把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系,形成知識的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力。10、骨髓瘤細(xì)胞滅活的病毒聚乙二醇電激獲得能分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞無菌、無毒補(bǔ)充配制的培養(yǎng)基中缺乏的營養(yǎng)成分及一些激素等促進(jìn)細(xì)胞生長的物質(zhì)與待測抗原結(jié)合催化檢測底物反應(yīng)6【解析】

1、單克隆抗體的制備過程:首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi),使其發(fā)生免疫,小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞。利用動物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合,單克隆抗體制備過程中的兩次篩選:第一次篩選:利用特定選擇培養(yǎng)基篩選,獲得雜交瘤細(xì)胞,即AB型細(xì)胞(A為B淋巴細(xì)胞,B為骨髓瘤細(xì)胞),不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞。第二次篩選:利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選,獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

2、單克隆抗體的作用:①作為診斷試劑:(最廣泛的用途)具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。②用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥,可制成“生物導(dǎo)彈”。【詳解】(1)根據(jù)圖示可知,從小鼠體內(nèi)提取的X為經(jīng)過免疫的漿細(xì)胞,則Y為骨髓瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)二者融合形成雜交瘤細(xì)胞常用滅活的病毒、聚乙二醇、電激等方法。融合后的細(xì)胞需要經(jīng)過c過程的初次篩選和d過程的抗體檢測和克隆化培養(yǎng),故d所示操作的目的是獲得能分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。(2)e過程為體外培養(yǎng)動物細(xì)胞,首先應(yīng)保證其處于無菌、無毒的環(huán)境,其次還需要提供充足的營養(yǎng)等條件,其中加動物血清的目的是補(bǔ)充配制的培養(yǎng)基中缺乏的營養(yǎng)成分及一些激素等促進(jìn)細(xì)胞生長的物質(zhì)。(3)酶標(biāo)抗體的作用是與待測抗原結(jié)合;酶能催化檢測底物反應(yīng),可通過測定酶反應(yīng)的產(chǎn)物量來判斷待測抗原量。研究人員獲得三種抗HCG單克隆抗體,分別記為A、B、C,為檢測它們之中哪兩種適合用于雙抗體夾心法,科研人員需要進(jìn)行6組實驗,分別是AA、BB、CC、AB、AC、BC,檢測并比較各組實驗的產(chǎn)物量。本題結(jié)合圖解,考查單克隆抗體制備的相關(guān)知識,意在考查考生識圖能力和理解所學(xué)知識的要點(diǎn),把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力;能運(yùn)用所學(xué)知識與觀點(diǎn),通過比較、分析與綜合等方法對某些生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理,做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論。11、XbaI和SacI防止目的基因自身環(huán)化、防止目的基因反向連接PCR2使DNA解鏈,然后使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上RNA聚合酶復(fù)制原點(diǎn)重組DNA的鑒別與選擇蛋白質(zhì)工程【解析】

1、基因工程的操作步驟包括:目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟。基因表達(dá)載體的構(gòu)建:①過程:一般用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體,再用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子。②目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用。③基因表達(dá)載體的組成:目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因。(1)啟動子在基因的首段,它是RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn),能控制著轉(zhuǎn)錄的開始;(2)終止子在基因的尾端,它控制著轉(zhuǎn)錄的結(jié)束;(3)標(biāo)記基因便于目的基因的鑒定和篩選。2、PCR擴(kuò)增技術(shù):PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:(1)模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。(2)模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合。(3)引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。【詳解】(1)識圖分析可知,構(gòu)建基因表達(dá)載體時,目的基因需要插入到啟動子和終止子之間,圖中啟動子和終止子之間存在XbaI和SacI的酶切位點(diǎn),因此需要用XbaI和SacI限制酶切割目的基因,以產(chǎn)生與質(zhì)粒相同的末端,相比用同一種酶進(jìn)行酶切,用兩種酶切割可以防止目的基因自身環(huán)化或防止目的基因反向連接。(2)為獲取大量的蜘蛛絲基因,常采用PCR擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增目的基因。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增蜘蛛絲基因前,需根據(jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計2種引物分別與2條模板鏈結(jié)合;進(jìn)行PCR時需加熱至90~95℃然后冷卻至55~60℃,此操作的目的是使DNA解鏈,然后使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上。(3)基因表達(dá)載體中的啟動子能夠與RNA聚合酶識別和結(jié)合,才能驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程,而載體本身的擴(kuò)增,需借助于載體上的復(fù)制原點(diǎn)進(jìn)行,載體上的標(biāo)記基因的作用是鑒別與篩選含有重組DNA的受體細(xì)胞。(4)研究人員發(fā)現(xiàn)若將蛛絲蛋白31號位的色氨

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