甲型肝炎滅活疫苗2HS20010016

PAGE1PAGE8甲型肝炎滅活疫苗質量標準InactivatedHepatitisAVirusVaccineJS200200181、外觀檢查可分層，上清液透明，搖均后應為均勻乳白色。2、裝量用已標定的刻度吸管量取。兒童劑量應不低于0.50ml,成人劑量應不低于1.00ml。3、pH值按《中國生物制品規程》(2000年版)pH測定方法進行，測定疫苗混合物(不少于5支疫苗合并在一起)，pH在200C時的范圍為6.8-7.5。4、無菌試驗按《中國生物制品規程》(2000年版)通則《生物制品無菌試驗規程》進行。結果應為陰性。5、異常毒性試驗按《中國生物制品規程》(2000年版)通則《生物制品異常毒性試驗規程》進行。到期動物應健在，體重增加。6、鋁含量的測定按《中國生物制品規程》(2000年版)中《氫氧化鋁含量的測定方法》進行。結果應在0.35-0.65mg/ml之間。7、殘余甲醛含量的測定按《中國生物制品規程》(2000年版)《殘余甲醛含量的測定方法》進行。結果應100g/ml。8、內毒素含量的測定按《中國藥典》(2000年版附錄)進行。結果應2.00EU/ml。9、2-苯氧乙醇含量的測定按《2-苯氧乙醇含量的測定》(附錄1)方法進行。結果應在4.25-5.75mg/ml之間。10、鑒別試驗按《鑒別試驗》(附錄2)方法進行。疫苗解離后與特定的甲肝抗體中和，證明含有甲肝抗原。11、相對效力試驗按《相對效力試驗》(附錄3)方法進行。疫苗(解離抗原后)中和甲肝與參比苗的比值為0.85-1.30。規格1440EL.U/ml(成人劑量)；720EL.U/0.5ml(兒童劑量)；8升/罐（進口分裝用）生產國別及生產廠比利時葛蘭素史克公司效期2-80C條件下保存，有效期3年。質量復核單位中國藥品生物制品檢定所甲型肝炎滅活疫苗質量標準起草說明本產品用于預防甲型肝炎，是由比利時葛蘭素史克生物技術公司生產(申請編號：HS20010016)、葛蘭素史克(中國)投資有限公司申報的。此疫苗為純化滅活疫苗，其質量標準目前我國尚未收載。擬定此質量標準的主要依據《中國生物制品規程》(2000年版)同類疫苗及廠家標準，此質量標準變化主要有：一、增加的項目主要有：1、甲肝病毒抗原含量；2、鋁含量的測定；3、效力試驗；4、2-苯氧乙醇含量5、游離甲醛含量測定；6、鑒別試驗；7、pH測定。二、由于該疫苗是滅活疫苗，與我國《生物制品規程》(2000年版)相比此質量標準中取消的項目有：1、病毒滴定；2、熱穩定性試驗；3、牛血清蛋白殘留量測定。三、需要修訂的檢定項目：疫苗效力試驗：所有國外生產廠家均以相對效力試驗表示，即用待檢疫苗與參考疫苗的比值表示，今后檢定擬采用此方法。特此說明。附錄2甲肝抗原鑒別試驗方法一、實驗步驟：1、用包被緩沖液稀釋純化HAV-IgG(1：300)包被微孔板，100l/孔，40C過夜；2、洗液洗三次，設一孔空白對照，三孔陰性對照，二孔陽性對照，在相應孔中加連續稀釋的參考疫苗解離后甲肝抗原和待測樣品20l/孔，過夜；3、用洗液洗三次，加入50l/孔酶標記HAV-IgG，置400C2小時。4、洗液洗四次，加入顯色劑100l/孔，置室溫15分鐘，加終止劑50l/孔。5、比色用酶標儀(波長492nm)測定OD值。二、結果計算：1、閾值計算閾值=陰性對照均值×2.12、結果判定閾值為陽性，閾值為陰性。3、計算含量按下列方法進行：將測出的參考標準及樣品的OD均值乘以1000后記入下表：方法：將待測樣品與特異抗體中和，用ELISA雙抗體夾心法測中和前后的甲肝抗原。材料：純化HAV-IgG：由本室純化，效價1：300酶標記HAV-IgG：來源本室，效價1：1000中和抗體：甲肝免疫球蛋白參考品(WHO100mIU/ml)實驗步驟：用包被緩沖液稀釋純化HAV-IgG(1：300)包被微孔板，100l/孔，40C過夜；每批待測抗原與抗體(1：1)370C中和1小時用洗液洗三次，設一孔空白對照，三孔陰性對照，二孔陽性對照及四孔細胞對照，在相應孔中加中和前和中和后待測樣品20l/孔，另設中和用免疫球蛋白對照兩孔，過夜；用洗液洗三次，加入50l/孔酶標記HAV-IgG，置400C2小時。洗液洗四次，加入顯色劑100l/孔，置室溫15分鐘，加終止劑50l/孔。比色；用酶標儀(波長492nm)測定OD值。計算結果：閾值計算閾值＝細胞對照均值×2.1結果判定閾值為陽性，閾值為陰性。待測樣品應中和前為陽性，中和后為陰性，證明其確為甲肝抗原。附錄3甲肝抗原的定量(相對效力試驗)測定方法：將已知含量的參考疫苗解離后甲肝抗原與待測樣品用ELISA雙抗體夾心法測定后計算含量：材料：純化HAV-IgG:由本室純化，效價1：300酶標記HAV-IgG：來源本室，效價1：1000已知含量的疫苗參考品稀釋度參考標準OD×1000(T)樣品OD×1000(S)1：211：221：231：241：25T5T4T3T2T1S5S4S3S2S1計算公式：含量Log-1V/WLog1.5V=0.2(T1+T2+T3+T4+T5)-0.2(S1+S2+S3+S4+S5)W=0.1(T5-T1+S5-S1)+(T4-T2+S4-S2)含量Log-1V/WLog1.5結果:批號含量該批疫苗的含量除以參考苗的已知含量即為相對效力試驗的比值。附錄12-苯氧乙醇含量的測定方法用高壓液相層析(HPLC)方法測定2-苯氧乙醇。用已知含量的2-苯氧乙醇作為標準，通過與樣品在HPLCUV-270nm吸收峰的比較計算樣品中的2-苯氧乙醇含量。試驗方法：1、標準品制備：量取2-苯氧乙醇標準品50mg于10ml容量瓶中，蒸餾水溶解定容后，取1ml至10ml容量瓶中，CH3CN定容，0.45um濾膜過濾后上樣。2、樣品制備：取1ml樣品于10ml容量瓶中，CH3CN定容，離心并用0.45um濾膜過濾后上樣。3、實驗條件：高效液相色譜UV-270nm檢測柱：microBondapack