CN118638781B 使用環狀RNA和microRNA進行細胞重編程的組合物和方法 （畢昇(北京)生物科技有限公司）

使用環狀RNA和microRNA進行細胞重編程的本發明提供了使用環狀RNA和microRNA進行細胞重編程的組合物和方法。一種使用環狀RNA和microRNA進行細胞重編程的組合物和方法。本發明將特定的miRNA組合與環狀RNA聯合2MYC、NANOG和LIN28A的外源環狀RNA分子；所述miRNA混合物為hsa_miR_17_5p/hsa_miR_2.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述circula無RNase的ddH2O中以1000ng/μl的終濃度制備circularRNA混合物，其中OCT4與其他5個因3.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所miRNA溶解在RNasefree的ddH2O中，制成最終濃度為5μM的原液；將4.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_23a_3p混合物，其中，所述circularRNA混合物為OCT4、SOX2、5.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3p混合物，其中，所述circularRNA混合物為OCT4、SOX2、6.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_340_3p混合物，其中，所述circularRNA混合物為OCT4、SOX2、7.一種使用權利要求1_6任一項所述的組合物制備誘導性多能干細胞(iPSCs)的方法，3[0001]本發明涉及細胞重編程技術領域，特別涉及使用環狀RNA和microRNA進行細胞重[0002]重編程是指不改變基因序列的情況下，通過表觀遺傳修飾如DNA甲基化來改變細胞命運的過程。原指哺乳動物生殖細胞發育過程中消除其親本攜帶的表觀遺傳標志的過進行重編程。OSKMLN的這四種環狀RNA是采用源自T4噬菌體的胸苷酸合酶基因或魚腥藻的pretRNALeu的重排內含子_外顯子(permutedintron_exon,PIE)I型內含子自剪接系統在室自制mRNA(參考：High_efficiencyRNA_basedreprogrammingofhumanPrimaryfilblasts)和ReproCELL(cat.00_0076)和Miltenyi(cat.130_132_990)的mRNA重編程試劑提高誘導性多能干細胞誘導率是該行業面臨的主要[0006]針對現有技術所存在的技術問題，本發明提供了一種使用環狀RNA和microRNA進4[0012]進一步優選地，所述組合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_[0013]進一步優選地，所述組合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_[0014]進一步優選地，所述組合物包括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_[0015]本發明的另一目的在于提供了一種使用上述組合物制備誘導性多能干細胞5括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_23a_3考CN201410604749.7中公開的外源環狀RNA分子的構[0033]所述hsa_miR_17_5p/hsa_miR_23a_3p混合物的制備方法是將凍干的microRNA溶括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3考CN201410604749.7中公開的外源環狀RNA分子的構[0038]所述hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3p混合物的制備方法是將凍干的microRNA溶括circularRNA混合物和hsa_miR_17_5p/hsa_miR_340_3考CN201410604749.7中公開的外源環狀RNA分子的構[0043]所述hsa_miR_17_5p/hsa_miR_144_3p混合物的制備方法是將凍干的microRNA溶括circularRNA混合物和has_miR_367_3p/has_miR_302a_36考CN201410604749.7中公開的外源環狀RNA分子的構[0048]所述has_miR_367_3p/has_miR_302a_3p混合物的制備方法是將凍干的microRNA[0053]1)向6孔細胞培養皿中加入使用了DMEM/F12稀釋了100倍的Matrigel354277[0054]2)將原代人新生兒成纖維細胞以6孔細胞培養皿格式每孔200至100,000個細胞的密度鋪在MatrigeI?包被的培養皿上；[0067]每隔48小時進行一次轉染，在前8天每次轉染后24小時更換為