CN117165721B 一種病毒核酸載體的單顆粒分析方法 （廈門(mén)福流生物科技有限公司）

本發(fā)明涉及一種病毒核酸載體一種或多種方法可選包括制作針對(duì)病毒核酸載體的粒徑標(biāo)準(zhǔn)曲線和/或濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)其粒徑和濃度進(jìn)行中各參數(shù)的綴合光學(xué)標(biāo)記試劑的特異性抗靶標(biāo)所述方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)傳統(tǒng)方案獲得的“病毒滴2步驟(1)：制備針對(duì)病毒核酸載體指標(biāo)中各參數(shù)的光中的至少一種，所述參數(shù)包括病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)信號(hào)和/或病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)信其中，所述病毒核酸載體包括逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、單純皰疹所述指標(biāo)包括病毒核酸載體的生物功能性滴度；所述病毒核酸載體的生所述病毒核酸載體的生物功能性滴度的計(jì)算公式為：病毒核酸載體的生其中，P為具有事件陽(yáng)性信號(hào)和待檢測(cè)生物功能性的陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群占所有具有事3所述指標(biāo)包括單純皰疹病毒載體的生物功能性滴度，所述單純皰疹病所述g囊膜糖蛋白包括囊膜糖蛋白gB,囊膜糖蛋白gC,囊膜糖蛋白gD,囊膜糖蛋白gE,囊膜糖蛋白gG,囊膜糖蛋白gH,囊膜糖蛋白gI,囊膜糖蛋白gJ,囊膜糖蛋白gL,囊所述指標(biāo)包括重組冠狀病毒載體的生物功能性滴度，所述重組冠狀病目標(biāo)核酸的缺失p24蛋白的慢病毒載體的10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，所述指標(biāo)包括逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的生物功能性滴所述指標(biāo)包括單純皰疹病毒載體的生物功能性滴度，所述單純皰疹病所述g囊膜糖蛋白包括囊膜糖蛋白gB,囊膜糖蛋白gC,囊膜糖蛋白gD,囊膜糖蛋白gE,囊膜糖蛋白gG,囊膜糖蛋白gH,囊膜糖蛋白gI,囊膜糖蛋白gJ,囊膜糖蛋白gL,囊所述指標(biāo)包括重組冠狀病毒載體的生物功能性滴度，所述重組冠狀病413.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述步驟(1)中將所述光學(xué)試劑與含病毒核酸載體的樣品混合的操作中還包括加入表面活性劑與含病毒核酸載體的15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，所述表面活性劑包括吐溫型表面活性劑、曲拉通X_20.根據(jù)權(quán)利要求17或18所述的方法，所述抗體包括能與逆轉(zhuǎn)錄病毒外殼表達(dá)蛋白特22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，所述能與慢病毒外殼表達(dá)蛋白特異性結(jié)合的抗體包23.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，所述能與逆轉(zhuǎn)錄病毒外殼表達(dá)蛋白特異性結(jié)合的抗所述脂膜染料試劑包含選自能夠親合細(xì)胞膜和其它脂溶性膜結(jié)構(gòu)親脂性的熒光染料；25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述熒光染料包所述核酸染料試劑包括AcridineOrange、ActinomycinD、7_AAD（7_氨基放線菌素5Homodimer_1(EthD_1)、EthidiumHomodimer_2(EthD_2)、EthidiumMonoazideBromide(EMA)、HexidiumIodide、HoHoechst33342,Trihydrochloride,Trihydrate、Trihydrate_FluoroPureGrade、Hoechst34580、LDS751、NeuroTraceBlueFluorescentNisslStain、NeuroTrace28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述抗靶標(biāo)試劑為配體或受體，所述配體或受體為29.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述抗靶標(biāo)試劑為配毒衣殼蛋白的配體或受體或者囊膜表達(dá)蛋白的配體或受體中30.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，所述熒光染料中的脂膜染料分別獨(dú)立選自DiD染料、PKH67染料、CellMaskGreen染料、CellMaskOrange染料、CellMaskRed染料、CellVue所述熒光染料中的核酸染料分別獨(dú)立包括AcridineOrange、ActinomycinD、7_AAD（氫乙啶）、EthidiumHomodimer_1(EthD_1)、EthidiumHomodimer_2(EthD_2)、 (bis_Benzimide)、Hoechst33342,Trihydrochloride,Trihydrate、Trihydrate_FluoroPureGrade、Hoechst34580、LDS751、NeuroTraceBlueFluorescentNisslStain、NeuroTraceGreenFluorescentNisslStain、NeuroTrace530/615RedFluorescentNisslStain、NeuroTraceDeep_RedFluorescentNisslStain、POPO_16Iodide、HCSNuclearMaskDeepRedStain、HCSNuclearMaskBlueStain、HCS用于表征病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)信號(hào)，分析具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的熒光通道檢測(cè)結(jié)具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信具有事件陽(yáng)性信號(hào)、病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰33.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述熒光具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表具有事件陽(yáng)性信號(hào)、病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)核酸具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表7具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒具有事件陽(yáng)性信號(hào)、VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體慢病毒載具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陰性信號(hào)為含有核具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和env囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸具有事件陽(yáng)性信號(hào)、env囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼逆轉(zhuǎn)具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和env囊膜蛋白表達(dá)陰性信號(hào)為具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和g囊膜糖蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸具有事件陽(yáng)性信號(hào)、g囊膜糖蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼單純具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和g囊膜糖蛋白表達(dá)陰性信具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和SPIKE蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸和8具有事件陽(yáng)性信號(hào)、SPIKE蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼重組冠具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和SPIKE蛋白表達(dá)陰性信號(hào)為含具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)具有事件陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和慢病毒p24蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核具有事件陽(yáng)性信號(hào)、慢病毒p24蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和慢病毒p24蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有核具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸具有事件陽(yáng)性信號(hào)、gag外殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體逆具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有核酸9具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核具有事件陽(yáng)性信號(hào)、VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體慢病具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和慢病毒p24蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含具有事件陽(yáng)性信號(hào)、慢病毒p24蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和p24蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和env囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有具有事件陽(yáng)性信號(hào)、env囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和env囊膜蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失env囊膜蛋白的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和g囊膜糖蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有具有事件陽(yáng)性信號(hào)、g囊膜糖蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和g囊膜糖蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失g囊膜糖蛋白的單純皰疹病毒載體具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和SPIKE蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和SPIKE蛋白的重組冠狀病毒載體具有事件陽(yáng)性信號(hào)、SPIKE蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼重具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和SPIKE蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失SPIKE蛋白的重組冠狀病毒具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表具有事件陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有具有事件陽(yáng)性信號(hào)、gag外殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和目標(biāo)核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志物具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體病毒核酸號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆粒群；c）具有事件陽(yáng)性信物表達(dá)陰性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的空殼體病毒核酸具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志物具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志物志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有核酸含有外殼的缺失囊膜的病具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志物具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體病具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和囊膜的缺失病毒外殼的病毒核酸載體具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志物囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和病毒外殼的缺失囊膜的病毒核酸載具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)、病毒外殼蛋白標(biāo)志膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸的缺失病毒外殼和囊膜的病毒核酸載體A1為采用散射光通道檢測(cè)圈門(mén)所得含病毒核酸載體的樣品溶液中與A2相同單位時(shí)間A2為采用散射光通道檢測(cè)圈門(mén)所得濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液中與A1相同單位時(shí)間內(nèi)具有事件陽(yáng)或A1為采用散射光通道檢測(cè)圈門(mén)所得含病毒核酸載體的樣品溶液中換算后在單位時(shí)間48.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，含有核酸和囊膜蛋白的病毒信號(hào)和囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆含有核酸和囊膜的病毒核酸載體的滴度的計(jì)算方法為：P1a與病毒核酸載體中顆粒計(jì)信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆49.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，空殼體慢病毒載體的滴度的計(jì)算空殼體慢病毒載體的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總數(shù)的百毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒50.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，含核酸號(hào)和囊膜表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總數(shù)的百分51.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，含核酸號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒52.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，含核酸的性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒53.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，含核酸的性信號(hào)和病毒外殼蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆54.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，含有核酸和囊56.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，含有核酸的標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的58.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含有目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)59.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含目標(biāo)核目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和囊膜蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒60.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含目標(biāo)核酸的缺核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆61.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含目標(biāo)核酸的標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信62.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含目標(biāo)核酸的缺失63.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含有目標(biāo)核酸和顆粒群占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總64.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含有目標(biāo)核酸和顆粒群占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總65.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，含有目標(biāo)核群占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總66.根據(jù)權(quán)利要求1_18、22_65任一項(xiàng)所述方法68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，所述顆粒檢測(cè)器為光電傳感器和具有限帶過(guò)濾高頻69.根據(jù)權(quán)利要求19所述方法，所述流式顆粒檢測(cè)設(shè)備為可實(shí)現(xiàn)樣本流定向流動(dòng)的顆71.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，所述顆粒檢測(cè)器為光電傳感器和具有限帶過(guò)濾高頻72.根據(jù)權(quán)利要求20所述方法，所述流式顆粒檢測(cè)設(shè)備為可實(shí)現(xiàn)樣本流定向流動(dòng)的顆74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的方法，所述顆粒檢測(cè)器為光電傳感器和具有限帶過(guò)濾高頻75.根據(jù)權(quán)利要求21所述方法，所述流式顆粒檢測(cè)設(shè)備為可實(shí)現(xiàn)樣本流定向流動(dòng)的顆77.根據(jù)權(quán)利要求76所述的方法，所述顆粒檢測(cè)器為光電傳感器和具有限帶過(guò)濾高頻[0002]病毒核酸載體為一類(lèi)通過(guò)遺傳操作對(duì)自身的元件進(jìn)行改造后能夠攜帶外源基因準(zhǔn)第一款溶瘤HSV_1(orienX010)病毒開(kāi)展臨床試驗(yàn);于2018年批準(zhǔn)了溶瘤HSV_2(rHSV2hGM_CSF)病毒進(jìn)入臨床試驗(yàn)。而近期密集開(kāi)展的非復(fù)制型重組冠狀病毒疫苗的臨靶標(biāo)試劑中的至少一種，所述參數(shù)包括病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)信號(hào)和/或病毒囊膜標(biāo)志的缺失p24蛋白的慢病毒載體的滴度、含有目標(biāo)核酸的缺失p24蛋白的慢病毒載體的滴度、env囊膜蛋白的逆轉(zhuǎn)錄病毒的滴度、含有目標(biāo)核酸和env囊膜蛋白的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的滴純皰疹病毒載體的生物功能性滴度包括：含有核酸和g囊膜糖蛋白的單純皰疹病毒載體的[0016]在一些實(shí)施例中，所述g囊膜糖蛋白可以為囊膜糖糖蛋白gD,囊膜糖蛋白gE,囊膜糖蛋白gG,囊膜糖蛋白gH,囊膜糖蛋白gI,囊膜糖蛋白gJ,囊膜糖蛋白gL,囊膜糖蛋白gM,囊膜糖蛋白gN中任一種或其組合。組冠狀病毒載體的生物功能性滴度包括：含有核酸和SPIKE蛋白的重組冠狀病毒載體的滴度、含有目標(biāo)核酸和SPIKE蛋白的重組冠狀病毒載體的滴度、空殼重組冠狀病毒載體的滴標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的散射光通道和或熒光通道檢測(cè)數(shù)據(jù)和/或流式顆粒檢測(cè)設(shè)[0021]在一些實(shí)施例中，所述步驟(1)中所述將所述光學(xué)試劑與含病毒核酸載體的樣品混合的操作中還可以包括加入表面活性劑與含病毒核酸[0022]在一些實(shí)施例中，所述步驟(1)中所述將所述光學(xué)試劑與含病毒核酸載體的樣品慢病毒外殼表達(dá)蛋白特異性結(jié)合的抗體、能與逆轉(zhuǎn)錄病毒外殼表達(dá)蛋白特異性結(jié)合的抗染料、PKH67染料、CellMaskGreen染料、CellMaskOrange染料、CellMaskRed染料、 (9_Amino_6_Chloro_2_Methoxyacridine)、BOBO (570/602),1mMsolutioninDMSO、DAPI(4',6_Diamidino_2_Phenylindole,（氫乙啶）、EthidiumHomodimer_1(EthD_1)、EthidiumHomodimer_2(EthD_2)、 (bis_Benzimide)、Hoechst332Pentahydrate(bis_Benzimide)FluoroPureGrade、Hoechst33342,Trihydrochloride,Trihydrate、Hoechst33342,Trihydrochloride,Trihydrate、Hoechst33342,Trihydrochloride,Trihydrate_FluoroPureGrade、Hoechst34580、LDS751、NeuroTrace435/455BlueFluorescentNisslStain、NeuroTrace500/525GreenFluorescentNisslStain、NeuroTrace530/615RedFluorescentNisslStain、dsDNAAssayKit、Quant_iTPicoGreendsDNAReagent、Quant_iTPicoGreendsDNAReagent、Quant_iTRiboGreenRNA檢測(cè)試劑盒、Quant_iTRiboGreenRNA試劑、SYTO40BlueFluorescentNucleicAcidStain、SYTO41BlueFluorescentNucleicAcidStain、SYTOBlueFluorescentNucleicAcidStainSamplerKit(SYTOdyes40,41,42,45)、SYTO9GreenFluorescentNucleicAcidStain、SYTO11GreenFluorescentNucleicAcidStain、SYTO12GreenFlSYTO13GreenFluorescentNucleicAcidStain、SYTO14GreenFluorescentNucleicAcidStain、SYTO16GreenFluorescentNucleicAcidStain、SYTO21GreenFluorescentNucleicAcidStain、SYTO24GreenFluorescentNucleicAcidStain、SYTOBCGreen熒光核酸染料、SYTOGreenFluorescentNucleicAcidStainSamplerKit#1_SYTOdyes11_16、SYTO82OrangeFluorescentNucleicAcidStain、SYTO83OrangeFluorescentNucleicAcidStain、SYTO84OrangeSYTOOrangeFluorescentNucleicAcidStainSamplerKit_SYTOdyes、SYTO17RedFluorescentNucleicAcidStain、SYTO59RedFluorescentNucleicAcidStain、SYTO60RedFluorescentNucleicAcidStain、SYTO61RedFluorescentNucleicAcidStain、SYTO62RedFluorescentNucleicAcidStain、SYTO63RedFluorescentNucleicAcidStain、SYTO64RedFluorescentNucleicAcidStain、SYTORNASelectGreenFluorescentcellStain、SYTOXBlue死細(xì)胞染色劑、SYTOXBlueNucleicAcidStain、SYTOXGreen死細(xì)胞染料、SYTOXGreenNucleicAcid(612/631)、HCSNuclearMaskDeepRedStain、HCSNuclearMaskBlueStain、HCS料與所述抗靶標(biāo)試劑直接綴合；或所述熒光染料借助識(shí)別基團(tuán)與所述抗靶標(biāo)試劑間接綴所述識(shí)別基團(tuán)能夠特異地識(shí)別所述抗靶標(biāo)試合包括將所述光學(xué)試劑和表面活性劑與含病毒核酸載光通道用于表征核酸或目標(biāo)核酸信號(hào)，另一種熒光通道用于表征病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)信囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸和囊膜的病毒標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失囊膜的病毒核酸載體射光通道和至少兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)設(shè)備或者帶有至少兩種熒光通道的流式顆[0047]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸和信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和VSV_G的慢病毒[0048]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體慢病顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失VSV_G的慢病毒載有散射光通道和至少兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)設(shè)備或者帶有至少兩種熒光通道的流用于表征病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)信號(hào)，分析具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的熒光通道檢測(cè)結(jié)[0051]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和env囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有和env囊膜蛋白表達(dá)信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和env囊膜蛋白的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的顆[0052]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、env囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼[0053]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和env囊膜蛋白表達(dá)陰性信號(hào)為含有核酸的缺失env囊膜蛋白的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的顆粒，或者具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和env囊膜蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失env囊膜蛋白的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體帶有散射光通道和至少兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)設(shè)備或者帶有至少兩種熒光通道的[0055]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和g囊膜糖蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有號(hào)和g囊膜糖蛋白表達(dá)信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和g囊膜糖蛋白的單純皰疹病毒載體[0056]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、g囊膜糖蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼[0057]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和g囊膜糖蛋白表達(dá)陰性信號(hào)為含有核酸的缺g囊膜糖蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失g囊膜糖蛋白的單純皰疹病毒載帶有散射光通道和至少兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)設(shè)備或者帶有至少兩種熒光通道的[0059]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和SPIKE蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核SPIKE蛋白表達(dá)信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和SPIKE蛋白的重組冠狀病毒載體[0060]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、SPIKE蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼重[0061]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和SPIKE蛋白表達(dá)陰性信號(hào)為含有核酸的缺失SPIKE蛋白的重組冠狀病毒載體的顆粒，或者具有事件陽(yáng)性信號(hào)、目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和SPIKE蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失SPIKE蛋白的重組冠狀病毒載體的性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和病毒外殼的病毒陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失病毒外殼的射光通道和至少兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)設(shè)備或者帶有至少兩種熒光通道的流式顆[0067]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和慢病毒p24蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含[0068]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、慢病毒p24蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空[0069]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和慢病毒p24蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有散射光通道和至少兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)設(shè)備或者帶有至少兩種熒光通道的流[0071]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和gag外殼蛋白的逆轉(zhuǎn)錄病毒載[0072]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、gag外殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼[0073]具有事件陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有性信號(hào)和gag外殼蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸的缺失gag外殼蛋白的逆轉(zhuǎn)兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)設(shè)備或帶有至少一種或至少兩種熒光通道的流式顆粒檢測(cè)道用于表征至少一種病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)信號(hào)或至少一種病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)信號(hào)，膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸、病毒外殼和囊膜的病毒核酸載體的顆粒群；志物表達(dá)陰性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸和囊膜的缺失病毒外殼的病毒核酸載體的顆毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和囊膜的缺失病毒外殼的病毒核酸膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有核酸含有外殼的缺失囊膜的病毒核酸載體的顆粒毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸和病毒外殼的缺失囊膜的病毒核酸膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有核酸的缺失病毒外殼和囊膜的病毒核酸載體的顆毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有目標(biāo)核酸的缺失病毒外殼和囊膜的病毒核酸[0085]A1為采用散射光通道檢測(cè)圈門(mén)所得含病毒核酸載體的樣品溶液中與A2相同單位[0086]A2為采用散射光通道檢測(cè)圈門(mén)所得濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液中與A1相同單位時(shí)間內(nèi)具有事[0092]A1為采用散射光通道檢測(cè)圈門(mén)所得含病毒核酸載體的樣品溶液中換算成在單位大小和粒度分布的計(jì)算方法為根據(jù)含不同粒徑的粒徑標(biāo)準(zhǔn)品的粒徑標(biāo)準(zhǔn)溶液的散射光通核酸載體的樣品溶液的散射光通道檢測(cè)圈門(mén)檢測(cè)結(jié)果通過(guò)單顆粒平均散射光強(qiáng)度與顆粒粒徑之間的關(guān)系曲線計(jì)算得到含病毒核酸載體的樣品溶液中病毒粒徑大小和粒度信號(hào)和囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆[0095]在一些實(shí)施例中，所述含有核酸和囊膜的病毒核酸載體的滴度的計(jì)算方法可以信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒空殼體慢病毒載體的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總數(shù)的百毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆信號(hào)的空殼體病毒核酸載體的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒號(hào)和囊膜表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總數(shù)的百分號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒性信號(hào)和病毒外殼蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和囊膜蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和囊膜蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒囊膜標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白標(biāo)志物表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性目標(biāo)核酸陽(yáng)性信號(hào)和病毒外殼蛋白表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總顆粒群占所有具有事件陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總?cè)赫妓芯哂惺录?yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總純皰疹病毒載體g囊膜糖蛋白陽(yáng)性信號(hào)或重組冠狀病毒SPIKE蛋白陽(yáng)性信號(hào)表示在對(duì)應(yīng)指號(hào)或重組冠狀病毒SPIKE蛋白陰性信號(hào)表示在對(duì)應(yīng)指標(biāo)所得結(jié)果散點(diǎn)圖設(shè)置的圈門(mén)中，位熒光信號(hào)替代散射光信號(hào)后，以事件的形式作為輸出信號(hào)來(lái)代表不低于粒徑30nm且不高[0123]在一些實(shí)施例中，所述步驟(2)中所述檢測(cè)的檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+[0124]在一些實(shí)施例中，所述步驟(2)中所述檢測(cè)的檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+樣品溶液中含有核酸和VSV_G的慢病毒載體的顆粒或含有核酸和VSV_G的逆轉(zhuǎn)錄病毒的顆載體的顆粒或含有核酸的缺失VSV_G的逆轉(zhuǎn)錄病毒的顆粒、和/或含目標(biāo)核酸的缺失VSV_G[0125]在一些實(shí)施例中，所述步驟(2)中所述檢測(cè)的檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+[0126]在一些實(shí)施例中，所述步驟(2)中所述檢測(cè)的檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+殼含有VSV_G的慢病毒載體的顆粒或缺失衣殼含有VSV_G的逆轉(zhuǎn)錄病毒的顆粒、和/或含有衣殼的缺失VSV_G的慢病毒載體的顆粒或含有衣殼的缺失VSV_G的逆轉(zhuǎn)錄[0127]在一些實(shí)施例中，所述步驟(2)中所述檢測(cè)的檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+溶液中含有囊膜的慢病毒載體的顆粒或含有囊膜的逆轉(zhuǎn)錄病毒的顆粒、和/或缺失囊膜的[0128]在一些實(shí)施例中，所述步驟(2)中所述檢測(cè)的檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+中含有核酸和囊膜的單純皰疹病毒載體顆粒、空殼單純皰疹病毒載體的顆粒和/或含有核[0129]在一些實(shí)施例中，所述步驟(2)中所述檢測(cè)的檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+樣品溶液中含有核酸和囊膜的單純皰疹病毒載體的顆粒、空殼單純皰疹病毒載體的顆粒和/或含有核酸的缺失囊膜的單純皰疹病毒載[0135]圖2為實(shí)施例1中散射光通道的檢測(cè)結(jié)果以及具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的熒光信號(hào)顆[0136]圖3為對(duì)比例1中HIV_1p24濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線和慢病毒載體產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)[0140]圖7為對(duì)比例4中散射光通道的檢測(cè)結(jié)果以及具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的熒光信號(hào)顆[0141]圖8為實(shí)施例4中關(guān)于不同濃度的膜通透劑處理后囊膜染料標(biāo)記后陽(yáng)性比率的對(duì)[0143]圖10為對(duì)比例5中關(guān)于不同廠家抗體試劑標(biāo)記后散射光通道的檢測(cè)結(jié)果以及具有[0144]圖11為實(shí)施例6中散射光通道的檢測(cè)結(jié)果以及具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的熒光信號(hào)顆[0145]圖12為實(shí)施例7中散射光通道的檢測(cè)結(jié)果以及具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的熒光信號(hào)顆囊膜糖蛋白gC,囊膜糖蛋白gD,囊膜糖蛋白gE,囊膜糖蛋白gG,囊膜糖蛋白gH,囊膜糖蛋白gI,囊膜糖蛋白gJ,囊膜糖蛋白gL,囊膜糖蛋白gM或囊膜糖蛋白gN中的至少一種。術(shù)人員可以將本說(shuō)明書(shū)中描述的不同實(shí)施例或示例以及不同實(shí)施例或示例的特征進(jìn)行結(jié)[0163]本發(fā)明所使用的試劑均可以從市場(chǎng)上購(gòu)得或者可以通過(guò)本發(fā)明所描述的方法制將熒光染料按照EZ_Link?馬來(lái)酰亞胺[0170]SYTOGreen（SYTOBCGreen_FluorescentNucleicAcidStains）、SYTO16、[0171]p24ELISA(QuickTiterHIVLentivirusQuantitationKit)購(gòu)自CellCy5_VSVG抗體（PE_Cy5anti_humanVSVG，貨號(hào)：NHAVSVG_PECy5_50T）、AF647_Anti_[0177]AF488_Anti_Spikeprotein[4A8],HumanIgG1,Kappa抗體購(gòu)自Absolute[0181]SARS_CoV_2(2019_nCoV)SpikePseudovirus載體產(chǎn)品的濃度約為1×1010[0186]OptimaMax_XPTabletop[0187]X81Universa[0189]實(shí)施例1：采用核酸染料和綴合熒光染料的VSVG抗體標(biāo)記后用納米流式檢測(cè)儀檢測(cè)KH2PO4[0196]FlowNanoAnalyzer檢測(cè)參數(shù)：激光檢測(cè)器488nm+638nm；單激光通道檢測(cè)[0197]雙重標(biāo)記后慢病毒載體的檢測(cè)：采用FlowNanoAnalyzer檢測(cè)雙重標(biāo)記后慢病毒體中融合性外殼G糖蛋白。分析具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的FITC熒光通道檢測(cè)結(jié)果和[0198]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸和VSV_G[0199]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體慢[0200]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陰性信號(hào)為含有核酸的缺失性信號(hào)的顆粒群為含目標(biāo)核酸的缺失VSV_G的慢病毒[0201]散射光通道的檢測(cè)結(jié)果以及具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的熒光信號(hào)顆粒群結(jié)果如圖2所[0203]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸散射光陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有散射[0204]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群為空殼體慢VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和核酸陰性信號(hào)的顆粒群的顆粒數(shù)占所有具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的顆粒[0205]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和和VSV_G表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有核為具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、核酸陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陰性信號(hào)的點(diǎn)的總數(shù)占所有具有散射[0206]5）慢病毒載體產(chǎn)品的粒徑分布檢測(cè)：設(shè)定檢測(cè)參數(shù)為：激光檢測(cè)器488nm+638品顯示峰的Median值和Events值并生成擬合曲線。對(duì)相同檢測(cè)參數(shù)下測(cè)試的慢病毒載體[0215]1）取慢病毒載體產(chǎn)品從103倍稀釋起，總共稀釋8個(gè)梯度（每個(gè)梯度之間相差106倍稀釋之后的稀釋度所在排孔全部未見(jiàn)綠色熒光。在104倍的稀釋度可見(jiàn)3個(gè)陽(yáng)性由于游離的p24的干擾以及具有p24蛋白表達(dá)的病毒顆粒并不代表該病毒顆粒具體侵染和例1和對(duì)比例2中，p24ELISA法測(cè)得的慢病毒載體產(chǎn)品的濃縮液病毒滴度為2.4×108TU/對(duì)于實(shí)際病毒滴度的高估。TCID50_GFP熒光蛋白與具有核酸和VSV_G的慢病毒載體的滴度為1.34×108TU/mL和p24ELISA法測(cè)得的慢病毒載體產(chǎn)品的濃縮液病毒滴度為2.4×108TU/mL低了約2個(gè)數(shù)量級(jí)，說(shuō)明其對(duì)估。說(shuō)明以具有核酸和VSV_G的慢病毒載體的滴度作為慢病毒載體組合物真實(shí)病毒滴度的液重懸沉淀即得到雙重標(biāo)記后慢病毒載體。[0228]FlowNanoAnalyzer檢測(cè)參數(shù)：激光檢測(cè)器488nm+638nm；單激光通道檢測(cè)[0229]雙重標(biāo)記后慢病毒載體的檢測(cè)：采用FlowNanoAnalyzer檢測(cè)雙重標(biāo)記后慢病毒[0230]具有P24表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有衣殼和VSV_G的慢病[0231]具有VSV_G表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和P24表達(dá)信號(hào)的顆粒群為缺失衣殼含有VSV_G的慢病毒[0232]具有P24表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)和VSV_G表達(dá)陰性信號(hào)為含有衣殼的缺失VSV_G的慢病毒載[0236]不同濃度的膜通透劑處理后獲得含有衣殼和VSV_G的慢病毒載體的顆粒占比比較上孵育30min。加入5μL的FITC_P24抗體（廠家：NanoFCM充分混勻，冰上避光孵育60[0242]FlowNanoAnalyzer檢測(cè)參數(shù)：激光檢測(cè)器488nm+638nm；單激光通道檢測(cè)熒光為P24熒光抗體激發(fā)信號(hào)用于表征慢病毒載體中的衣殼蛋白，分析具有的FITC熒光通[0244]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)和P24表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有衣殼的慢病毒載體的顆[0245]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)和P24表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為缺失衣殼的慢病毒載體的顆方式獲得含有衣殼和VSV_G的慢病毒載體的顆粒占總病慢病毒載體顆粒數(shù)占比僅為14%，說(shuō)明膜通透劑對(duì)于熒光染料穿透至慢病毒囊膜內(nèi)對(duì)衣殼蛋白進(jìn)行標(biāo)記檢測(cè)具有關(guān)鍵作用。[0248]實(shí)施例4：采用不同濃度的膜通透劑處理后采用囊膜染料標(biāo)記后用納米流式檢測(cè)到不同濃度膜通透劑處理后的標(biāo)記后的慢病毒載體（分別為0×膜通透劑處理后的標(biāo)記后[0254]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)和DID膜染料陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有囊膜的慢病毒載體的[0255]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)和DID膜染料陰性信號(hào)的顆粒群為缺失囊膜的慢病毒載體[0256]不同濃度的膜通透劑處理后具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的熒光信號(hào)顆粒群對(duì)比結(jié)果如的膜通透劑是獲得準(zhǔn)確含有衣殼和VSV_G的慢病毒載體顆粒測(cè)定結(jié)果的關(guān)[0264]具有核酸陽(yáng)性信號(hào)和gB表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸和囊膜的單純皰疹病[0266]具有核酸陽(yáng)性信號(hào)和gB表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為含有核酸的缺失囊膜的單純皰疹病毒載體產(chǎn)品中含有核酸和囊膜的單純皰疹病毒載體顆粒占比為35[0271]用PBS緩沖液將單純皰疹病毒載體產(chǎn)品HSV_1或HSV_2的濃縮液稀釋10倍，得溶液1，取50μL溶液1分別與20μL不同來(lái)源的綴合熒光染料的抗體AF647_Anti_HSV1+HSV2gB熒光染料的HerpesSimplexVirus體（綴合AF647熒光染料的Anti_HSV1+HSV2gD抗體，Anti_HSV1+HSV2gD抗體廠家：[0272]上述綴合AF647熒光染料的Anti_HSV1+HSV2gB抗體的制備方法包括將AF647熒光染料按照EZ_Link?馬來(lái)酰亞胺蛋白標(biāo)記試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法綴合至Anti_HSV1+[0273]上述綴合AF647熒光染料的HerpesSimplexVirusType1/2gB抗體的制備方法包括將AF647熒光染料按照EZ_Link?馬來(lái)酰亞胺蛋白標(biāo)記試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法綴合至HerpesSimplexVirusType1/2gB抗體，獲得綴合AF647熒光染料的HerpesSimplex[0275]上述綴合AF647熒光染料的Anti_HSV1+HSV2gD抗體的制備方法包括將AF647熒光染料按照EZ_Link?馬來(lái)酰亞胺蛋白標(biāo)記試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法綴合至Anti_HSV1+[0277]取對(duì)比例5步驟1）所得雙重標(biāo)記后單純皰疹病毒載體按[0278]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)和熒光抗體表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有囊膜特定標(biāo)志物[0279]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)和熒光抗體表達(dá)陰性信號(hào)的顆粒群為缺失囊膜特定標(biāo)志物[0280]獲得含有囊膜特定標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性的單純皰疹病毒載體顆粒的顆粒占比比較結(jié)[0281]結(jié)論：在本實(shí)施例5和對(duì)比例5中，比較AF647_Anti_HSV1+HSV2gB抗體[10B7]（綴合AF647熒光染料的Anti_HSV1+HSV2gB抗體[10B7]，Anti_HSV1+HSV2gB抗體Anti_HSV1+HSV2gD抗體（綴合AF647熒光染料的Anti_HSV1+HSV獲得對(duì)純皰疹病毒載體核酸和囊膜同時(shí)標(biāo)記的最優(yōu)結(jié)果。50μL溶液1與20μLPKH67脂膜染料（廠家：sigma）于37℃孵育30min，4℃1μMSYTO62Red核酸染料的PBS緩沖液重懸沉淀即得[0290]雙重標(biāo)記后單純皰疹病毒載體的檢測(cè)：采用FlowNanoAnalyzer檢測(cè)雙重標(biāo)記后PC5熒光表征核酸染料激發(fā)信號(hào)用于表征單純皰疹病毒載體的核酸。分析具有散射光陽(yáng)性[0291]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、SYTO62陽(yáng)性信號(hào)和PKH67陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為含有核酸和[0292]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、SYTO62陰性信號(hào)和PKH67陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群為空殼單純皰[0293]具有散射光陽(yáng)性信號(hào)、SYTO62陽(yáng)性信號(hào)和PKH67陰性信號(hào)為含有核酸的缺失囊膜體的顆粒占所有具有散射光陽(yáng)性信號(hào)的顆粒群的顆粒總數(shù)的百分比測(cè)于37℃孵育30min，4℃100000g離心80min，棄上清，用PBS緩沖液重懸