實驗室室間質(zhì)量控制程序

實驗室室間質(zhì)量控制程序目的采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評價各實驗室的試驗結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實驗室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性。基本概念質(zhì)量控制是監(jiān)視ELISA操作全過程，排除誤差，維持標(biāo)準(zhǔn)化操作的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進行的：確定控制的對象；規(guī)定控制對象的標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)期值）；制定或選擇控制方法和手段；測量實際數(shù)據(jù)；比較或比對實際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明原因。超出預(yù)定誤差范圍，報警系統(tǒng)發(fā)出信號，反饋通道中斷。采取行動，解決差異。恢復(fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進行。質(zhì)控圖是把某一檢驗的性能數(shù)據(jù)與所計算出來的預(yù)期的"控制限"進行比較的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進行時，按時間順序而抽選出來的，其目的是檢測檢驗過程中變異的可追溯性原因。可追溯性的誤差原因，是指除去隨機誤差以外的其他原因。在GLP概念里QC即指IQC，其定義為：由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本室工作的可靠性，旨在監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高批內(nèi)批間樣本檢驗的一致性，以確定檢驗報告是否可靠或可否發(fā)出的一項工作。免疫測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此QC手段不能照搬生化模式。灰區(qū)概念把定量分析的正常值范圍引入定性分析建立灰區(qū)概念，即將COV值上下的一段區(qū)域定為陽性可疑，需重復(fù)試驗或換試劑重測以確定其陰陽性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報告+（陽性）。灰區(qū)概念對血站系統(tǒng)的獻血員篩查尤為重要。灰區(qū)的設(shè)置有兩種：COV×（1±CV），CV為該試劑的批內(nèi)CV（一般在15%～20%時間）；COV±2s，s為實驗室做室內(nèi)質(zhì)控ROC的s。高值鉤鐮效應(yīng)（HD-HOOK）在二位點夾心ELISA中，其劑量反應(yīng)曲線的高劑量（HIGHDOSE，HD）區(qū)段，線性走向不是呈平臺狀無限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子或一把鐮刀（HOOK），MILES（1974）根據(jù)此現(xiàn)象寫實性地稱之為"HD-HOOK"效應(yīng)。產(chǎn)生該現(xiàn)象的分子機理有"分子變構(gòu)說"和"濃度效應(yīng)"等推論。一步法和二步法均存在"HD-HOOK"效應(yīng)，只是前者出現(xiàn)的更早些，大多數(shù)是高值低吸光度，很少陰性結(jié)果。質(zhì)量控制血清質(zhì)控血清是已有靶值的血清，在每次的常規(guī)檢驗中加入一份或數(shù)份，通過所得結(jié)果來了解本次檢驗的情況。質(zhì)控血清檢驗的結(jié)果如能控制其誤差在一定范圍內(nèi)，就說明該檢驗沒有發(fā)生不允許的誤差。如果出現(xiàn)超過允許誤差范圍的異常結(jié)果，提示該檢驗不合格，應(yīng)尋找原因，糾正后，重檢待測標(biāo)本。因此質(zhì)控血清在質(zhì)控工作中起重要作用。衛(wèi)健委臨床檢驗中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清，可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開展某項檢驗的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按3-6個月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清，在一批質(zhì)控血清將用完之前，需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定，較長期內(nèi)效價不變，其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測作用。質(zhì)量控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質(zhì)控血清定值，一般定在正常值與異常值交界點上，定性測定時處于弱陽性水平，稱為臨界值。乙肝標(biāo)志物臨界值的制定，應(yīng)按臨床要求，為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽性的標(biāo)準(zhǔn)。臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽性對照品和陰性對照品以外的第三個對照品，它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽性反應(yīng)的標(biāo)本不漏檢。質(zhì)控血清的制備，每個實驗室可以根據(jù)自己的條件，選用臨床中心提供的質(zhì)控血清，或按以下方法自己制備本室使用的質(zhì)控血清（以乙肝質(zhì)控血清為例）。收集新鮮的無溶血、無黃疸、無細菌污染的陽性血清。56℃加熱10小時滅活。離心或過濾除去沉淀。用10%的小牛血清或正常人血清（PBS緩沖液）將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成分更接近于檢測標(biāo)本。抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿，封口，20℃保存?zhèn)溆谩２豢煞磸?fù)凍融。被檢物要求檢出的水平常被認為是質(zhì)控血清應(yīng)選擇的水平。如果該試驗還有其他要求，則應(yīng)加所要求濃度的質(zhì)控物。標(biāo)定含量。20-30次測定結(jié)果刪除〉±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值，并與已知定值血清對比測定。室間質(zhì)評的方法1.發(fā)質(zhì)控物進行調(diào)查，這是目前國內(nèi)外常見的形式，采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實驗室，各實驗室在規(guī)定的日期進行檢驗，并將結(jié)果報至組織者（部、省臨檢中心）。組織者通過統(tǒng)計分析，再將評價結(jié)果寄回實驗室，使其了解工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)問題，提高質(zhì)量。其缺點為由于各實驗室吃小灶或互相打電話修改結(jié)果而達不到真正評價作用。這是國內(nèi)外室間質(zhì)評的常用形式。部臨檢中心對乙肝標(biāo)志物ELISA檢驗的室間質(zhì)評采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實驗室，各實驗室在規(guī)定的日期進行檢驗，并將檢驗結(jié)果報至部臨檢中心。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計分析，將評價結(jié)果寄回各實驗室。通過評價，各實驗室了解本室工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)差距，并設(shè)法改進，以不斷提高檢驗質(zhì)量。這種評價方式有一定缺點，即各實驗室常對質(zhì)控物特殊對待，在檢驗時選用特殊試劑盒，選派特別的技術(shù)員進行檢驗，有的實驗室互相核對結(jié)果并作修改。這就使EQA的結(jié)果不能反映該實驗室日常工作水平。2.現(xiàn)場調(diào)查，事先不通知，臨時派出人員到各實驗室，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測一組標(biāo)本，進行評價。這種方法可以解決實際問題，進行現(xiàn)場指導(dǎo)，組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常進行。派觀察員到實驗室進行試劑調(diào)查，這種調(diào)查事先不通知，臨時派觀察員到實驗室，指定采用常規(guī)方法，檢驗規(guī)定的一組標(biāo)本，進行評價。成績計算方法1.定性試驗：檢驗結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，得100分，錯誤不得分，總計實驗室的得分。從全部參評單位的得分中求出該批質(zhì)控物平均分（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），再通過公式計算出每一個實驗室的得分比值（SI）SI=（實驗室得分-平均分X）/平均標(biāo)準(zhǔn)差（s），SI在0.0-0.9間為良好，1.0-1.9間為優(yōu)秀，SI為負值時數(shù)值越大成績越差。2.定量試驗：SI=（實驗室測定值-預(yù)期值X）/預(yù)期值的標(biāo)準(zhǔn)差s，SI越小，表明越靠近靶值，成績越好。0-1.0為優(yōu)秀，1.1-2.0為良好，>2.0為差。SI無正負之分。（五）質(zhì)