GB/T 37746-2019草魚呼腸孤病毒三重RT-PCR檢測方法

ICS6502030

B41..

中華人民共和國國家標準

GB/T37746—2019

草魚呼腸孤病毒三重RT-PCR檢測方法

TriplexRT-PCRassayfordetectionofgrasscarpreoviruses

2019-06-04發布2020-01-01實施

國家市場監督管理總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T37746—2019

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業農村部提出

。

本標準由全國水產標準化技術委員會歸口

(SAC/TC156)。

本標準起草單位中國水產科學研究院珠江水產研究所

:。

本標準主要起草人曾偉偉王慶吳淑勤王英英石存斌宋新建李瑩瑩趙長臣

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T37746—2019

引言

本文件的發布機構提請注意如下事實聲明符合本文件時可能涉及到第章操作步驟和附錄引

,,7“”B“

物與用于診斷草魚呼腸孤病毒的三重檢測引物組試劑盒及方法專利號等

”《PCR、》(:ZL201210039379.8)

相關專利的使用

。

本文件的發布機構對于該專利的真實性有效性和范圍無任何立場

、。

該專利持有人已向本文件的發布機構保證他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款和條件下

,,

就專利授權許可進行談判該專利持有人的聲明已在本文件的發布機構備案相關信息可以通過以下

。。

聯系方式獲得

:

專利持有人中國水產科學研究院珠江水產研究所

:

地址廣州市荔灣區西塱興漁路號珠江水產研究所

:1

請注意除上述專利外本文件的某些內容仍可能涉及專利本文件的發布機構不承擔識別這些專

,。

利的責任

。

Ⅱ

GB/T37746—2019

草魚呼腸孤病毒三重RT-PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了種不同基因型草魚呼腸孤病毒的三重檢測技術

3RT-PCR。

本標準適用于對草魚的種基因型呼腸孤病毒的核酸進行檢測與分離株的鑒定

3。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

水生動物產地檢疫采樣技術規范

SC/T7103

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

焦炭酸二乙酯

DEPC:(diethypyrocarbonate)

脫氧核苷酸三磷酸

dNTP:(deoxy-riboncleosidetriphosphate)

溴化乙錠

EB:(ethidiumbromide)

草魚呼腸孤病毒

GCRV:(grasscarpreovirus)

莫洛尼氏鼠白血病病毒逆轉錄酶

M-MLVRT:(moloneymurineleukemiavirusreversetran-

scriptase)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphatebuffersolution)

聚合酶鏈式反應

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

酶抑制劑

RNaseinhibitor:RNA

逆轉錄聚合酶鏈式反應

RT-PCR:-(reverse-transcriptionpolymerasechainaction)

TaqTaq聚合酶

DNApolymerase:DNA

三重三重逆轉錄聚合酶鏈式反應

RT-PCR:-(triplexreversetranscriptasepolymerasechainreac-

tion)

4技術原理

草魚呼腸孤病毒現有和型個基因型根據同一基因型不同毒株之間共有的保守

(GCRV)Ⅰ、ⅡⅢ3,

序列分別設計特異性引物這些引物可以特異性擴增相對應基因型分離株的核酸而不能擴增其他基因

,,

型分離株的核酸在同一聚合酶鏈式反應反應體系里加入針對個基因型的對保守引物便

。(PCR)33,

可同時擴增出個大小有差異的核酸片段可以通過瓊脂糖凝膠電泳的電泳條帶分子量大小來區分從

3