檢測生物組織中糖類脂肪和蛋白質

一.實驗原理：某些化學試劑能夠使生物組織中的有關有機化合物產生特定的顏色反應。如：①.還原性糖的鑒定：還原性糖+②.脂肪的鑒定：

脂肪+脂肪+

③.蛋白質的鑒定：蛋白質+④淀粉+斐林試劑磚紅色沉淀蘇丹Ⅲ橘黃色蘇丹Ⅳ紅色雙縮脲試劑紫色碘藍色二.目的要求：

嘗試用化學試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質1、還原糖的檢測和觀察：選材應該選擇含

量高.顏色為植物組織以蘋果.梨為最好。糖白色或近于白色制備組織樣液：三.實驗過程:制漿：去皮、切塊、研磨過濾：（用單層紗布）取液：（２mL）可溶性還原糖與斐林試劑在加熱的過程中生成磚紅色沉淀，說明植物組織樣液中含有還原糖。注入2mL蘋果組織樣液注入1mL剛配制好的斐林試劑水浴加熱約2min檢測步驟變成磚紅色50----650C的溫水結論：甲乙液等量混勻振蕩、混合搖勻呈現藍色①還原糖有

。②試劑：

.（甲液：0.1g/ml

的

,乙液：0.05g/ml的

.）甲乙液必須

后再加入樣液中，

。③必須

。葡萄糖，果糖，麥芽糖用水浴加熱斐林試劑NaOHCuSO4等量混合均勻現配現用注意事項：④顏色變化：淺藍色棕色磚紅色2、脂肪的檢測和觀察：圓形小顆粒呈橘黃色，說明有脂肪存在。方法一：待測組織樣液+蘇丹Ⅲ染液→橘黃色取材：花生種子(浸泡3～4h），將子葉削成薄片方法二：制作子葉臨時切片，用顯微鏡觀察子葉細胞的著色情況。制片①取最理想的薄片②在薄片上滴蘇丹Ⅲ染液（2～3min）③去浮色（用50﹪酒精）④制成臨時裝片觀察低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察結論：

注意事項：①切片要薄，如厚薄不均就會導致觀察時有的地方清晰有的地方模糊。②酒精的作用是：

。③需使用顯微鏡觀察④使用不同的染色劑染色時間不同，顏色變化：

。洗去浮色橘黃色或紅色3、蛋白質的檢測和觀察：選材應該選擇含

豐富的豆漿或雞蛋清溶液。（避免材料自身的顏色對實驗變化顏色的掩蓋）蛋白質黃豆漿濾液或蛋清稀釋液制備組織樣液呈色反應組織樣液2mL雙縮脲試劑A液1mL雙縮脲試劑B液4滴搖勻后變成紫色結論：說明組織樣液中存在蛋白質。（3）注意事項：①試劑：

（A液：0.1g/ml的

；B液：0.01g/ml的

）先加

，再加

。

B液要求量適中，否則多余的B液將會與A液發生反應生成Cu（OH）2顯色而遮蓋原有的顏色。②鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對比雙縮脲試劑A液1mlB液4滴NaOH③用于蛋白質鑒定的蛋清必須稀釋，以免實驗后粘住試管壁，不易洗刷CuSO4蛋白質的檢測結果斐林試劑與雙縮脲試劑的比較：A液:0.1g/mLNaOHB液:0.01g/mLCuSO4甲液:0.1g/mLNaOH乙液:0.05g/mLCuSO4紫色物質生成磚紅色沉淀先加A液，再加B液，不需加熱甲液與乙液先混再用，且現配現用，需加熱蛋白質還原性糖試劑組成檢驗結果試劑用法檢測對象雙縮脲試劑斐林試劑問題探討:1、在做還原糖、蛋白質鑒定的實驗時，為什么要留出一部分樣液？作對照2、使用雙縮脲試劑時為什么B液只能加3～4滴而不能過量？

過量的雙縮脲試劑B會與試劑A反應，使溶液呈藍色，而掩蓋生成的紫色。3、為什么斐林試劑要現配現用，不能放置太久？

時間太長，Cu(OH)2懸濁液就沉淀在試管底部而無法參與反應。深化4、淀粉的檢測和觀察：取材：馬鈴薯勻漿檢測組織樣液2mL碘液2滴結論：說明組織樣液中存在淀粉。注意：常用材料：馬鈴薯試劑：

。顏色變化：

。碘液變藍搖勻后變成藍色試驗常見錯誤總結1、藥劑過量①淀粉中加碘液過多；②牛奶中過多CuSO4過多；③還原糖（果汁）中斐林試劑過多2、用品認錯，試劑加錯或者沒加3、不是所有的牛奶都叫特侖蘇，也不是所有的試驗都需要加熱4、對光不對，切片太厚等1.在下列四支試管中分別加入一些物質，甲試管:豆漿;乙試管:氨基酸溶液;丙試管:牛奶和蛋白酶;丁試管:人血液中的紅細胞和蒸餾水.上述四支試管中加入雙縮脲試劑振蕩后,有紫色反應的是()A.甲、丁B.甲、乙、丁C.甲、乙、丙D.甲、丙

對應訓練D2.下列關于實驗操作步驟的敘述中，正確的是

Ａ．用于鑒定可溶性還原糖的斐林試劑甲液和乙液，可直接用于蛋白質的鑒定

Ｂ.脂肪的鑒定需要用顯微鏡才能看到被染成橘黃色的脂肪滴

C.鑒定可溶性還原糖時，要加入斐林試劑甲液搖勻后，再加入乙液

Ｄ．用于鑒定蛋白質的雙縮脲試劑A液與B液要混合均勻后，再加入含樣品的試管中，且必須現配現用Ｂ3、青蘋果汁遇碘液顯藍色，熟蘋果汁能與斐林試劑作用產生磚紅色沉淀，下列結論中最合理的是()A．青蘋果汁中有淀粉，不含還原糖

B．熟蘋果汁中含還原糖，沒有淀粉

C．蘋果轉熟時，大量淀粉水解成還原糖

D．蘋果轉熟時單糖聚合成淀粉

C4、安徽阜陽劣