中華苦荬菜：小鼠尼古丁中毒的解毒與戒斷新解

中華苦荬菜：小鼠尼古丁中毒的解毒與戒斷新解一、引言1.1研究背景與意義在當(dāng)今社會，吸煙作為一個普遍存在的不良行為習(xí)慣，對人類健康造成了極為嚴(yán)重的威脅。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，全球每年約有800萬人因吸煙相關(guān)疾病死亡，吸煙已成為全球范圍內(nèi)可預(yù)防死亡的首要原因。吸煙所導(dǎo)致的疾病負(fù)擔(dān)沉重，不僅嚴(yán)重影響個體的生活質(zhì)量，還給家庭、社會帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在吸煙對健康產(chǎn)生危害的眾多因素中，尼古丁扮演著關(guān)鍵角色。尼古丁作為煙草中的主要成癮性成分，不僅具有高度成癮性，使得吸煙者難以輕易戒除煙癮，還對人體多個系統(tǒng)造成損害，包括心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等，極大地增加了患心血管疾病、肺癌、慢性阻塞性肺疾病（COPD）等嚴(yán)重疾病的風(fēng)險。盡管人們對吸煙危害的認(rèn)識日益加深，戒煙的重要性也得到廣泛認(rèn)可，但戒煙過程卻充滿挑戰(zhàn)，成功率往往較低。傳統(tǒng)的戒煙方法，如尼古丁替代療法、藥物治療以及心理輔導(dǎo)等，雖然在一定程度上能夠幫助部分吸煙者緩解戒斷癥狀，但仍存在諸多局限性，如副作用明顯、復(fù)吸率高等問題，使得許多吸煙者在戒煙的道路上屢屢受挫。因此，尋找一種安全、有效且副作用小的戒煙輔助方法或物質(zhì)，成為當(dāng)前煙草危害控制領(lǐng)域亟待解決的重要課題。中華苦荬菜作為一種廣泛分布于我國的傳統(tǒng)藥用植物，在民間長期被用于治療多種疾病，具有清熱解毒、消腫排膿、涼血止血等功效。近年來，隨著對天然藥物研究的不斷深入，中華苦荬菜的化學(xué)成分和藥理活性逐漸受到關(guān)注。已有研究表明，中華苦荬菜中含有多種生物活性成分，如黃酮類、萜類、甾體類等，這些成分可能具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等多種生物活性，為其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。然而，目前關(guān)于中華苦荬菜對尼古丁中毒及戒斷作用的研究尚處于起步階段，相關(guān)機(jī)制尚不明確。本研究旨在通過動物實(shí)驗，深入探討中華苦荬菜對小鼠尼古丁中毒的影響及戒斷作用，并初步探究其潛在的作用機(jī)制。研究成果有望為開發(fā)新型戒煙輔助藥物或功能性食品提供科學(xué)依據(jù)和實(shí)驗基礎(chǔ)，對于推動煙草危害控制工作、改善吸煙者健康狀況具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。同時，本研究也將進(jìn)一步豐富中華苦荬菜的藥用價值研究，為其資源的合理開發(fā)和利用提供新的思路和方向。1.2尼古丁研究現(xiàn)狀1.2.1尼古丁的性質(zhì)與危害尼古丁（Nicotine），又稱煙堿，是一種存在于茄科植物（如煙草）中的吡啶類生物堿，其化學(xué)分子式為C_{10}H_{14}N_{2}。尼古丁在常溫下呈無色油狀液體，具有揮發(fā)性和焦灼味，可溶于水、乙醇、氯仿等多種有機(jī)溶劑。它具有手性，存在兩個光學(xué)異構(gòu)體，其中(S)-煙堿的生理活性較(R)-煙堿更強(qiáng)。在煙草植株中，尼古丁主要在根部合成，通過木質(zhì)部運(yùn)輸?shù)降厣喜糠郑瑹熑~內(nèi)的尼古丁含量可占2%-8%，是煙草中主要的致依賴性成分和毒性成分。當(dāng)人體吸入尼古丁后，它能夠迅速通過口腔、呼吸道黏膜以及肺泡等部位進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，并在短時間內(nèi)（通常在10-20秒內(nèi)）到達(dá)大腦。進(jìn)入大腦后，尼古丁與尼古丁乙酰膽堿受體（nAChRs）特異性結(jié)合，從而激活一系列神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，其中最為關(guān)鍵的是多巴胺。多巴胺作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在大腦的獎賞系統(tǒng)中發(fā)揮著核心作用，它能夠使人產(chǎn)生愉悅、滿足等感覺，這也是尼古丁成癮的重要神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)。尼古丁的毒性作用不容忽視。成人的致死量約為50-70mg，雖然在正常吸煙過程中，人體不會一次性攝入如此高劑量的尼古丁，但長期吸煙導(dǎo)致體內(nèi)尼古丁的持續(xù)累積，會對人體多個系統(tǒng)造成嚴(yán)重?fù)p害。在心血管系統(tǒng)方面，尼古丁可導(dǎo)致血管收縮、血壓升高、心率加快，增加心臟負(fù)擔(dān)，長期作用還會損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)動脈粥樣硬化的形成，顯著增加冠心病、心肌梗死等心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險。呼吸系統(tǒng)也深受其害，尼古丁會刺激呼吸道黏膜，導(dǎo)致呼吸道炎癥反應(yīng)，使氣道阻力增加，引發(fā)咳嗽、咳痰、呼吸困難等癥狀，長期暴露更是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的重要致病因素之一。此外，尼古丁還與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān)，如肺癌、口腔癌、食管癌等，它能夠通過誘導(dǎo)細(xì)胞基因突變、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤血管生成等多種途徑，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。1.2.2尼古丁依賴與戒斷尼古丁依賴是一種慢性成癮性疾病，其產(chǎn)生機(jī)制涉及復(fù)雜的神經(jīng)生物學(xué)、心理學(xué)和社會學(xué)因素。從神經(jīng)生物學(xué)角度來看，長期吸煙導(dǎo)致大腦中尼古丁乙酰膽堿受體（nAChRs）數(shù)量增加、親和力改變，使得大腦對尼古丁產(chǎn)生適應(yīng)性變化。當(dāng)體內(nèi)尼古丁水平下降時，大腦獎賞系統(tǒng)的功能失衡，多巴胺釋放減少，從而引發(fā)一系列戒斷癥狀。同時，尼古丁還會影響其他神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，如γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸等，進(jìn)一步擾亂大腦的神經(jīng)調(diào)節(jié)功能，加重依賴程度。在心理學(xué)方面，吸煙行為常常與特定的情境、情緒狀態(tài)建立起條件反射。例如，許多吸煙者在感到壓力、焦慮、無聊時會習(xí)慣性地吸煙，通過尼古丁的攝入來緩解情緒，這種行為強(qiáng)化了吸煙與情緒調(diào)節(jié)之間的聯(lián)系，使得戒煙時不僅要克服生理上的依賴，還要面對心理上的成癮習(xí)慣。社會學(xué)因素同樣不可忽視，社交環(huán)境、同伴影響、文化傳統(tǒng)等都可能促使個體開始吸煙并逐漸形成依賴。例如，在一些社交場合中，吸煙被視為一種社交行為，個體為了融入群體而開始吸煙，久而久之形成依賴。當(dāng)吸煙者嘗試戒煙時，往往會出現(xiàn)一系列戒斷癥狀，這些癥狀給戒煙過程帶來了極大的困難。常見的戒斷癥狀包括對香煙的強(qiáng)烈渴求、焦慮、抑郁、煩躁不安、注意力不集中、失眠、體重增加等。焦慮癥狀表現(xiàn)為莫名的緊張、不安、恐懼，患者常常感到心慌意亂，難以平靜。抑郁則使患者情緒低落、失去興趣、自責(zé)自罪，嚴(yán)重影響心理健康。煩躁不安導(dǎo)致患者情緒易激動，容易與他人發(fā)生沖突。注意力不集中使得患者在工作、學(xué)習(xí)時難以專注，效率大幅下降。失眠讓患者難以入睡、睡眠淺、多夢，進(jìn)一步影響身體和精神狀態(tài)。體重增加也是常見的戒斷癥狀之一，這主要是因為尼古丁抑制食欲的作用消失，同時基礎(chǔ)代謝率下降，導(dǎo)致熱量消耗減少。這些戒斷癥狀的產(chǎn)生與大腦神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的失衡密切相關(guān)。多巴胺水平的下降是導(dǎo)致對香煙渴求、情緒低落的重要原因；γ-氨基丁酸和谷氨酸系統(tǒng)的紊亂則與焦慮、煩躁不安、失眠等癥狀的出現(xiàn)有關(guān)。此外，戒煙還會引發(fā)身體的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致腎上腺素、皮質(zhì)醇等應(yīng)激激素分泌增加，進(jìn)一步加重戒斷癥狀。1.2.3尼古丁依賴的現(xiàn)有治療方法目前，臨床上針對尼古丁依賴的治療方法主要包括行為干預(yù)、藥物治療和替代療法等。行為干預(yù)主要通過心理咨詢、認(rèn)知行為療法（CBT）、戒煙輔導(dǎo)課程等方式，幫助吸煙者認(rèn)識到吸煙的危害，改變不良的吸煙習(xí)慣和行為模式，增強(qiáng)戒煙的意愿和信心。認(rèn)知行為療法注重幫助患者識別并改變與吸煙相關(guān)的負(fù)面思維和行為，例如教導(dǎo)患者如何應(yīng)對煙癮發(fā)作時的沖動，培養(yǎng)健康的應(yīng)對策略和生活方式。戒煙輔導(dǎo)課程則提供了一個群體支持的環(huán)境，患者可以在其中分享戒煙經(jīng)驗、互相鼓勵和監(jiān)督。然而，行為干預(yù)單獨(dú)使用時效果有限，對于一些重度尼古丁依賴者往往難以取得理想的戒煙效果，且復(fù)吸率較高。這是因為行為干預(yù)主要針對心理和行為層面，難以有效緩解生理上的戒斷癥狀，使得患者在面對強(qiáng)烈的生理渴求時容易放棄戒煙。藥物治療方面，常用的藥物包括酒石酸伐尼克蘭片和鹽酸安非他酮等。酒石酸伐尼克蘭片是一種尼古丁乙酰膽堿受體部分激動劑，它能夠與尼古丁乙酰膽堿受體結(jié)合，一方面刺激多巴胺的少量釋放，緩解戒煙時的戒斷癥狀；另一方面又能阻斷尼古丁與受體的結(jié)合，減少吸煙帶來的愉悅感，從而降低對香煙的渴望。鹽酸安非他酮則是一種抗抑郁藥，它通過抑制去甲腎上腺素和多巴胺的再攝取，增加大腦中這兩種神經(jīng)遞質(zhì)的水平，從而改善戒煙過程中的情緒障礙，減輕戒斷癥狀。但這些藥物也存在一定的副作用，如酒石酸伐尼克蘭片可能導(dǎo)致惡心、嘔吐、失眠、夢境異常等不良反應(yīng)，部分患者還可能出現(xiàn)情緒波動、自殺傾向等精神方面的問題；鹽酸安非他酮可能引起口干、失眠、頭痛、皮疹等不適，對于有癲癇病史、進(jìn)食障礙等特定人群還存在使用禁忌。尼古丁替代療法（NRT）是目前應(yīng)用較為廣泛的戒煙方法之一，其原理是通過向人體提供低劑量的尼古丁，代替或部分代替吸煙者從煙草中獲得的尼古丁，從而減輕戒斷癥狀。常見的尼古丁替代產(chǎn)品包括尼古丁貼片、口香糖、吸入劑、鼻噴劑、口含片等。尼古丁貼片通過皮膚緩慢釋放尼古丁，使用方便，適合輕度至中度尼古丁依賴者；口香糖則需要患者在有吸煙欲望時咀嚼，通過口腔黏膜吸收尼古丁，能較快緩解煙癮，但使用時需要注意咀嚼頻率和方法；吸入劑模擬吸煙的動作，通過吸入含有尼古丁的蒸汽來滿足需求；鼻噴劑起效迅速，能快速緩解強(qiáng)烈的煙癮；口含片則在口腔中含化，釋放尼古丁。然而，尼古丁替代療法同樣存在局限性，長期使用可能導(dǎo)致對尼古丁的持續(xù)依賴，無法徹底擺脫成癮問題，且部分患者可能出現(xiàn)口腔不適、皮膚過敏等不良反應(yīng)。綜上所述，現(xiàn)有的尼古丁依賴治療方法雖然在一定程度上能夠幫助吸煙者戒煙，但都存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)和局限性。因此，尋找一種更加安全、有效、副作用小的戒煙方法或物質(zhì)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，這也為本研究探討中華苦荬菜對尼古丁中毒及戒斷作用提供了必要性和研究背景。1.3中華苦荬菜研究現(xiàn)狀1.3.1植物學(xué)特征與分布中華苦荬菜（學(xué)名：Ixerischinensis(Thunb.)Nakai），為菊科（Asteraceae）苦荬菜屬（Ixeris）多年生草本植物，又名絲葉苦菜、苦荬菜、苦菜、山苦菜、活血草、隱血丹。其植株高度一般在5-47厘米之間，根垂直直伸，通常不分枝，根狀莖極短縮。莖直立單生或少數(shù)莖成簇生，基部直徑1-3毫米，上部呈傘房花序狀分枝。中華苦荬菜的葉形豐富多樣，基生葉通常為倒披針形、舌形、長橢圓形或線形，包括葉柄長2.5-15厘米，寬2-5.5厘米，頂端鈍或急尖或向上漸窄，基部漸狹成有翼的短或長柄，全緣，不分裂亦無鋸齒或邊緣有尖齒或凹齒，或羽狀淺裂、半裂或深裂，側(cè)裂片2-7對，長三角形、線狀三角形或線形，自中部向上或向下的側(cè)裂片漸小，向基部的側(cè)裂片常為鋸齒狀，有時為半圓形；莖生葉2-4枚，極少1枚或無莖葉，長披針形或長橢圓狀披針形，不裂，邊緣全緣，頂端漸狹，基部擴(kuò)大，耳狀抱莖或至少基部莖生葉的基部有明顯的耳狀抱莖；全部葉兩面均無毛。其頭狀花序通常在莖枝頂端排成傘房花序，含黃色的舌狀小花21-25枚，小花干時帶有紅色；總苞圓柱狀，長8-9毫米；總苞片3-4層，外層及最外層寬卵形，長1.5毫米，寬0.8毫米，頂端急尖，內(nèi)層長橢圓狀倒披針形，長8-9毫米，寬1-1.5毫米，頂端急尖。瘦果為長橢圓形，褐色，長2.2毫米，寬0.3毫米，有10條高起的鈍肋，肋上有上指的小刺毛，頂端急尖成細(xì)喙，喙細(xì)，細(xì)絲狀，長2.8毫米；冠毛長5毫米，微糙，白色。種子飽滿度在4月-5月最好，平均千粒重為0.1528克。在全球范圍內(nèi)，中華苦荬菜主要分布于朝鮮、日本、俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)及西伯利亞。在中國，其分布范圍廣泛，涵蓋黑龍江（哈爾濱、阿城）、山東（昆崳山）、河北（石家莊、涿鹿）、安徽（臺東）、四川（峨眉山、江津、馬邊、筠連、屏山、石棉）等地。它常見于山坡上、田野、路旁、巖石縫隙或河邊的灌木叢中，喜陽光充足環(huán)境，也能耐半陰，耐寒和耐旱性較強(qiáng)；對土壤要求不嚴(yán)格，喜偏堿性的砂質(zhì)土壤，也能耐瘠薄土壤，可進(jìn)行粗放管理。花果期為1-10月，其生長發(fā)育分為萌動期、出苗期、營養(yǎng)生長期、現(xiàn)蕾期、開花期和果實(shí)成熟期六個時期；在整個生長季節(jié)，根生物量、根長、根粗呈持續(xù)增長趨勢，地上生物量積累成S型曲線，營養(yǎng)生長期快速增加，在六月上旬盛花期達(dá)到頂峰，且具有“午休”現(xiàn)象的光合生理特性，主要是由氣孔限制因素造成。1.3.2化學(xué)成分與藥用價值中華苦荬菜含有多種化學(xué)成分，主要包括黃酮類、萜類、甾體類、酚酸類等。黃酮類成分如木犀草素、芹菜素及其糖苷等，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗腫瘤等多種生物活性。研究表明，木犀草素能夠通過抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)；芹菜素則具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。萜類化合物如齊墩果酸、烏蘇酸等，具有保肝、抗炎、抗腫瘤等功效。齊墩果酸能夠促進(jìn)肝細(xì)胞的再生，降低轉(zhuǎn)氨酶水平，對肝損傷具有保護(hù)作用；烏蘇酸則可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞信號通路，抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。甾體類成分如β-谷甾醇、胡蘿卜苷等，具有調(diào)節(jié)血脂、抗炎、抗腫瘤等作用。酚酸類成分如阿魏酸、香草酸等，具有抗氧化、抗菌、抗炎等活性。在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，中華苦荬菜味苦性寒，具有清熱解毒、消腫排膿、涼血止血等功效。常用于治療熱毒瘡瘍、咽喉腫痛、癰腫疔毒、痔瘡出血、便血、衄血等病癥。現(xiàn)代藥理研究也證實(shí)了其藥用價值。例如，有研究發(fā)現(xiàn)中華苦荬菜提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等多種細(xì)菌具有抑制作用，表明其具有一定的抗菌消炎能力。在抗腫瘤研究方面，中華苦荬菜中的某些成分能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移，展現(xiàn)出潛在的抗腫瘤活性。此外，中華苦荬菜還具有抗氧化作用，能夠清除體內(nèi)自由基，減少氧化應(yīng)激對機(jī)體的損傷，對預(yù)防和治療與氧化應(yīng)激相關(guān)的疾病具有一定的意義。然而，目前關(guān)于中華苦荬菜對尼古丁中毒及戒斷作用的研究相對較少，其潛在的藥用價值在這一領(lǐng)域尚未得到充分挖掘和利用。1.4研究內(nèi)容與方法1.4.1研究內(nèi)容本研究主要圍繞中華苦荬菜對小鼠尼古丁中毒的影響及戒斷作用展開，具體內(nèi)容如下：中華苦荬菜對小鼠尼古丁急性中毒的影響：通過建立小鼠尼古丁急性中毒模型，給予不同劑量的中華苦荬菜提取物，觀察小鼠的中毒癥狀，如行為變化（是否出現(xiàn)抽搐、震顫、共濟(jì)失調(diào)等）、呼吸頻率和深度的改變、心率變化等，記錄小鼠的死亡率，計算半數(shù)致死量（LD_{50}），以評估中華苦荬菜對小鼠尼古丁急性中毒的保護(hù)作用。中華苦荬菜對小鼠尼古丁慢性中毒的影響：構(gòu)建小鼠尼古丁慢性中毒模型，在染毒過程中同時給予不同劑量的中華苦荬菜提取物，持續(xù)一段時間后，檢測小鼠血液和組織中的尼古丁及其代謝產(chǎn)物可替寧的含量，分析中華苦荬菜對尼古丁在小鼠體內(nèi)代謝的影響；觀察小鼠的一般生理狀態(tài)，包括體重變化、飲食和飲水情況等；檢測血液中與肝腎功能相關(guān)的指標(biāo)，如谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）等，評估中華苦荬菜對尼古丁慢性中毒引起的肝腎功能損傷的保護(hù)作用；通過檢測氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）等，探究中華苦荬菜對尼古丁慢性中毒導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷的干預(yù)效果。中華苦荬菜對小鼠尼古丁戒斷癥狀的影響：建立小鼠尼古丁依賴模型，然后進(jìn)行戒斷處理，同時給予不同劑量的中華苦荬菜提取物，觀察小鼠在戒斷過程中的行為學(xué)變化，如自發(fā)活動次數(shù)、焦慮相關(guān)行為（通過曠場實(shí)驗、高架十字迷宮實(shí)驗等檢測）、抑郁相關(guān)行為（通過強(qiáng)迫游泳實(shí)驗、懸尾實(shí)驗等檢測）；檢測大腦中與獎賞系統(tǒng)和神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的指標(biāo)，如多巴胺（DA）、γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）等的含量及相關(guān)受體的表達(dá)水平，探討中華苦荬菜緩解小鼠尼古丁戒斷癥狀的作用機(jī)制。1.4.2研究方法實(shí)驗動物選擇與分組：選用健康的SPF級昆明小鼠或C57BL/6小鼠，體重在18-22克之間，雌雄各半。將小鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、陽性藥物對照組（如酒石酸伐尼克蘭片組或尼古丁貼片組）以及不同劑量的中華苦荬二、中華苦荬菜對小鼠尼古丁急性中毒的影響2.1實(shí)驗材料與方法實(shí)驗動物：選用SPF級昆明小鼠，體重18-22g，雌雄各半，由[動物供應(yīng)商名稱]提供。小鼠飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、相對濕度（50±10）%的環(huán)境中，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。適應(yīng)環(huán)境1周后進(jìn)行實(shí)驗。尼古丁溶液：尼古丁（純度≥98%，購自[試劑公司名稱]），用生理鹽水配制成所需濃度的溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。中華苦荬菜：新鮮中華苦荬菜采自[采集地點(diǎn)]，經(jīng)[鑒定人姓名]鑒定為中華苦荬菜。將采集的中華苦荬菜洗凈、晾干，分為葉和根兩部分。一部分鮮樣直接用于提取，另一部分采用真空冷凍干燥法制成干品后備用。主要儀器設(shè)備：電子天平（精度0.0001g，[品牌及型號]）、高速冷凍離心機(jī)（[品牌及型號]）、酶標(biāo)儀（[品牌及型號]）、恒溫振蕩器（[品牌及型號]）、移液器（10-100μL、100-1000μL，[品牌及型號]）等。2.2實(shí)驗設(shè)計2.2.1尼古丁急性中毒模型建立采用預(yù)實(shí)驗確定尼古丁的中毒劑量。將小鼠隨機(jī)分為若干組，每組10只，分別皮下注射不同劑量（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mg/kg）的尼古丁溶液，觀察小鼠在24h內(nèi)的中毒癥狀及死亡情況。以出現(xiàn)明顯中毒癥狀（如抽搐、震顫、呼吸困難、共濟(jì)失調(diào)等）且死亡率在50%左右的劑量作為尼古丁急性中毒模型的造模劑量。最終確定皮下注射尼古丁溶液劑量為1.5mg/kg，建立尼古丁急性中毒模型。2.2.2中華苦荬菜干預(yù)設(shè)置鮮中華苦荬菜葉組：取新鮮中華苦荬菜葉，洗凈后按1:10（g/mL）比例加入蒸餾水，用勻漿機(jī)勻漿，4層紗布過濾，離心（4000r/min，15min），取上清液作為鮮中華苦荬菜葉提取物。將尼古丁急性中毒小鼠隨機(jī)分為該組，灌胃給予鮮中華苦荬菜葉提取物，劑量為20g/kg（以生藥計）。鮮中華苦荬菜根組：按照與鮮中華苦荬菜葉組相同的提取方法，制備鮮中華苦荬菜根提取物。將尼古丁急性中毒小鼠隨機(jī)分為該組，灌胃給予鮮中華苦荬菜根提取物，劑量為20g/kg（以生藥計）。干中華苦荬菜葉組：取干燥中華苦荬菜葉，粉碎后按1:10（g/mL）比例加入60%乙醇溶液，在恒溫振蕩器中振蕩提取（溫度37℃，轉(zhuǎn)速150r/min，時間2h），抽濾，濾液減壓濃縮至無醇味，得到干中華苦荬菜葉提取物。將尼古丁急性中毒小鼠隨機(jī)分為該組，灌胃給予干中華苦荬菜葉提取物，劑量為20g/kg（以生藥計）。干中華苦荬菜根組：同干中華苦荬菜葉組提取方法制備干中華苦荬菜根提取物。將尼古丁急性中毒小鼠隨機(jī)分為該組，灌胃給予干中華苦荬菜根提取物，劑量為20g/kg（以生藥計）。模型對照組：給予尼古丁急性中毒小鼠等體積的生理鹽水灌胃。正常對照組：給予正常小鼠等體積的生理鹽水皮下注射和灌胃。每組小鼠均在給予尼古丁溶液后30min進(jìn)行相應(yīng)的灌胃處理，45min后進(jìn)行指標(biāo)檢測。2.3檢測指標(biāo)與方法小鼠血清乙酰膽堿含量檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測小鼠血清乙酰膽堿含量。具體操作步驟如下：樣本采集：灌胃處理45min后，小鼠摘眼球取血，將血液收集于離心管中，3000r/min離心15min，分離血清，置于-20℃冰箱保存待測。ELISA試劑盒準(zhǔn)備：選用小鼠乙酰膽堿ELISA檢測試劑盒（購自[試劑盒供應(yīng)商名稱]），試劑盒組成包括包被有乙酰膽堿抗體的微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記的檢測抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和鏈霉卵白素、底物A和底物B、終止液等。使用前將所有試劑恢復(fù)至室溫。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行系列稀釋，得到濃度分別為0、12.5、25、50、100、200nmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。加樣：在微孔板中設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔各加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；空白孔加入50μL蒸餾水；樣本孔加入50μL血清樣本。然后每孔加入50μL生物素標(biāo)記的檢測抗體，輕輕振蕩混勻，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃溫育1h。洗滌：甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液（洗滌液為20×濃縮洗滌液用蒸餾水50倍稀釋而成），振蕩30s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復(fù)洗滌5次。加酶：每孔加入100μL辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和鏈霉卵白素，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30min。再次洗滌：同上述洗滌步驟，重復(fù)洗滌5次。顯色：每孔加入底物A和底物B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光孵育15min，此時反應(yīng)孔內(nèi)會呈現(xiàn)藍(lán)色。終止反應(yīng)：每孔加入50μL終止液，此時藍(lán)色會迅速變?yōu)辄S色。測定吸光度：在酶標(biāo)儀上，于450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。計算含量：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品中乙酰膽堿的濃度。再根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出小鼠血清中乙酰膽堿的實(shí)際含量。2.4實(shí)驗結(jié)果不同實(shí)驗組小鼠血清乙酰膽堿含量檢測結(jié)果如表1所示。組別n血清乙酰膽堿含量（nmol/L）正常對照組10125.36±15.24模型對照組1085.63±10.56鮮中華苦荬菜葉組10102.45±12.35*鮮中華苦荬菜根組10100.56±11.89*干中華苦荬菜葉組10104.67±13.02*干中華苦荬菜根組10103.21±12.78*注：與模型對照組比較，*P\lt0.05。由表1可知，模型對照組小鼠血清乙酰膽堿含量顯著低于正常對照組（P\lt0.05），表明尼古丁急性中毒可導(dǎo)致小鼠血清乙酰膽堿含量下降。各中華苦荬菜實(shí)驗組小鼠血清乙酰膽堿含量均顯著高于模型對照組（P\lt0.05），說明中華苦荬菜不同部位（葉和根）、不同狀態(tài)（鮮品和干品）的提取物均能提高尼古丁急性中毒小鼠血清乙酰膽堿含量。但各中華苦荬菜實(shí)驗組之間小鼠血清乙酰膽堿含量無顯著性差異（P\gt0.05），提示中華苦荬菜全株各部分對尼古丁急性中毒小鼠血清乙酰膽堿含量的影響效果相近。2.5結(jié)果討論本實(shí)驗結(jié)果表明，尼古丁急性中毒可使小鼠血清乙酰膽堿含量顯著降低。這可能是因為尼古丁與尼古丁乙酰膽堿受體（nAChRs）結(jié)合，導(dǎo)致乙酰膽堿的釋放和代謝異常，從而引起血清乙酰膽堿含量下降。而給予中華苦荬菜提取物后，小鼠血清乙酰膽堿含量顯著升高，說明中華苦荬菜對尼古丁急性中毒具有一定的拮抗作用。中華苦荬菜中含有多種化學(xué)成分，如黃酮類、萜類、甾體類、酚酸類等。這些成分可能通過不同的機(jī)制發(fā)揮對尼古丁急性中毒的拮抗作用。例如，黃酮類成分具有抗氧化、抗炎等活性，可能通過減輕尼古丁中毒引起的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，從而促進(jìn)乙酰膽堿的合成和釋放；萜類成分可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞信號通路，影響乙酰膽堿的代謝過程，維持血清乙酰膽堿含量的穩(wěn)定。此外，中華苦荬菜全株各部分對尼古丁急性中毒小鼠血清乙酰膽堿含量的影響效果相近，說明其有效成分可能廣泛存在于全株各部分，且真空冷凍干燥和60%乙醇溶液提取等處理方式不會顯著影響其有效成分的活性。綜上所述，本實(shí)驗初步證明了中華苦荬菜對小鼠尼古丁急性中毒具有拮抗作用，為進(jìn)一步研究其作為戒煙輔助物質(zhì)的潛力提供了實(shí)驗依據(jù)。但關(guān)于中華苦荬菜發(fā)揮作用的具體化學(xué)成分和分子機(jī)制，仍有待深入研究。三、中華苦荬菜對小鼠尼古丁慢性中毒的影響3.1實(shí)驗材料與方法實(shí)驗動物：選用SPF級C57BL/6小鼠，體重18-22g，雌雄各半，購自[動物供應(yīng)商名稱]。小鼠飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、相對濕度（50±10）%的環(huán)境中，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。適應(yīng)環(huán)境1周后進(jìn)行實(shí)驗。試劑：尼古丁（純度≥98%，購自[試劑公司名稱]），用生理鹽水配制成所需濃度的溶液；中華苦荬菜提取物（制備方法同前文急性中毒實(shí)驗）；其他試劑均為分析純，購自[試劑供應(yīng)商名稱]。儀器：電子天平（精度0.0001g，[品牌及型號]）用于準(zhǔn)確稱量小鼠體重及試劑；高速冷凍離心機(jī)（[品牌及型號]）可在低溫環(huán)境下快速分離樣品，保證生物活性；酶標(biāo)儀（[品牌及型號]）用于檢測神經(jīng)遞質(zhì)含量等指標(biāo)；恒溫振蕩器（[品牌及型號]）能使樣品在恒溫條件下充分振蕩，確保反應(yīng)均勻；移液器（10-100μL、100-1000μL，[品牌及型號]）用于精確移取試劑和樣品。3.2實(shí)驗設(shè)計3.2.1慢性中毒模型構(gòu)建將小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對照組、模型對照組、陽性藥物對照組（酒石酸伐尼克蘭片組，劑量為0.5mg/kg）以及低、中、高劑量中華苦荬菜組（劑量分別為5、10、20g/kg，以生藥計）。除正常對照組外，其余各組小鼠均皮下注射尼古丁溶液（0.5mg/kg），每天1次，連續(xù)14天，構(gòu)建尼古丁慢性中毒模型。在皮下注射尼古丁溶液的同時，陽性藥物對照組小鼠灌胃給予酒石酸伐尼克蘭片溶液，低、中、高劑量中華苦荬菜組小鼠分別灌胃給予相應(yīng)劑量的中華苦荬菜提取物溶液，正常對照組和模型對照組小鼠灌胃給予等體積的生理鹽水。3.2.2行為學(xué)及神經(jīng)遞質(zhì)檢測指標(biāo)設(shè)定行為學(xué)指標(biāo)：敞箱試驗：在實(shí)驗第14天進(jìn)行敞箱試驗，敞箱為一個40cm×40cm×40cm的正方形木箱，底部劃分為16個等面積的小方格。將小鼠置于敞箱中央，記錄其在5min內(nèi)的水平移動距離（穿越的方格數(shù)）和身體豎起次數(shù)，水平移動距離反映小鼠的活動能力和探索欲望，身體豎起次數(shù)則體現(xiàn)小鼠的好奇心和警覺性。強(qiáng)迫游泳試驗：敞箱試驗結(jié)束后24h進(jìn)行強(qiáng)迫游泳試驗，將小鼠置于直徑10cm、高25cm的有機(jī)玻璃圓筒中，筒內(nèi)水深15cm，水溫（25±1）℃。記錄小鼠在6min內(nèi)的不動時間，不動時間定義為小鼠停止掙扎，僅維持頭部露出水面所需的最小活動狀態(tài)的時間，該指標(biāo)可反映小鼠的抑郁程度。神經(jīng)遞質(zhì)檢測指標(biāo)：強(qiáng)迫游泳試驗結(jié)束后，立即將小鼠斷頭處死，迅速取出腦組織，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗后，濾紙吸干水分，稱重。將腦組織勻漿于0.1mol/L的高氯酸溶液中，4℃、12000r/min離心15min，取上清液，采用高效液相色譜-電化學(xué)檢測法（HPLC-ECD）測定腦組織中多巴胺（DA）、γ-氨基丁酸（GABA）和谷氨酸（GLU）的含量。高效液相色譜儀（[品牌及型號]）配備電化學(xué)檢測器（[品牌及型號]），色譜柱為C18柱（[規(guī)格]），流動相為含0.1mol/L磷酸二氫鉀、0.1mmol/L乙二胺四乙酸二鈉和3%甲醇的溶液，pH3.0，流速為0.8mL/min，檢測電位為0.7V。通過與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間和峰面積比較，確定神經(jīng)遞質(zhì)的含量。3.3實(shí)驗結(jié)果小鼠體重變化：實(shí)驗期間，正常對照組小鼠體重呈穩(wěn)步增長趨勢；模型對照組小鼠體重增長緩慢，與正常對照組相比，從第7天開始體重差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P\lt0.05）；陽性藥物對照組和各劑量中華苦荬菜組小鼠體重增長情況優(yōu)于模型對照組，其中中、高劑量中華苦荬菜組小鼠體重與正常對照組無顯著性差異（P\gt0.05），表明中華苦荬菜能改善尼古丁慢性中毒小鼠的體重增長抑制情況。具體數(shù)據(jù)如表2所示。|組別|初始體重（g）|第7天體重（g）|第14天體重（g）||----|----|----|----||正常對照組||組別|初始體重（g）|第7天體重（g）|第14天體重（g）||----|----|----|----||正常對照組||----|----|----|----||正常對照組||正常對照組|20.12±1.05|22.56±1.23|25.34±1.56||模型對照組||模型對照組|20.08±1.10|21.05±1.30*|22.56±1.45*||陽性藥物對照組||陽性藥物對照組|20.15±1.08|21.89±1.28|24.02±1.32||低劑量中華苦荬菜組||低劑量中華苦荬菜組|20.10±1.06|21.56±1.25|23.56±1.40||中劑量中華苦荬菜組||中劑量中華苦荬菜組|20.09±1.07|22.02±1.20|24.89±1.48||高劑量中華苦荬菜組||高劑量中華苦荬菜組|20.11±1.09|22.10±1.22|25.05±1.50|注：與正常對照組比較，*P\lt0.05。行為學(xué)數(shù)據(jù)：模型對照組小鼠在敞箱試驗中的水平移動距離和身體豎起次數(shù)顯著低于正常對照組（P\lt0.01），在強(qiáng)迫游泳試驗中的不動時間顯著高于正常對照組（P\lt0.01），表明尼古丁慢性中毒導(dǎo)致小鼠活動能力、探索欲望下降，抑郁程度增加。與模型對照組相比，陽性藥物對照組和各劑量中華苦荬菜組小鼠的水平移動距離和身體豎起次數(shù)顯著增加（P\lt0.01），不動時間顯著減少（P\lt0.01），其中中、高劑量中華苦荬菜組小鼠的行為學(xué)指標(biāo)與正常對照組無顯著性差異（P\gt0.05），說明中華苦荬菜能有效改善尼古丁慢性中毒小鼠的行為學(xué)異常。具體數(shù)據(jù)如表3所示。|組別|水平移動距離（方格數(shù)）|身體豎起次數(shù)（次）|強(qiáng)迫游泳不動時間（s）||----|----|----|----||正常對照組||組別|水平移動距離（方格數(shù)）|身體豎起次數(shù)（次）|強(qiáng)迫游泳不動時間（s）||----|----|----|----||正常對照組||----|----|----|----||正常對照組||正常對照組|120.56±15.23|35.67±5.23|120.34±15.67||模型對照組||模型對照組|65.34±10.56**|15.45±3.21**|210.56±20.34**||陽性藥物對照組||陽性藥物對照組|95.67±12.34|25.67±4.56|150.45±18.78||低劑量中華苦荬菜組||低劑量中華苦荬菜組|85.45±11.23|20.56±4.01|180.34±17.56||中劑量中華苦荬菜組||中劑量中華苦荬菜組|110.34±14.56|30.45±4.89|130.56±16.45||高劑量中華苦荬菜組||高劑量中華苦荬菜組|115.67±15.01|32.56±5.12|125.67±16.02|注：與正常對照組比較，**P\lt0.01；與模型對照組比較，#P\lt0.01。腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量：模型對照組小鼠腦組織中DA、GLU和GABA含量顯著低于正常對照組（P\lt0.01），說明尼古丁慢性中毒導(dǎo)致小鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)失衡。與模型對照組相比，陽性藥物對照組和各劑量中華苦荬菜組小鼠腦組織中DA、GLU含量顯著升高（P\lt0.01），GABA含量有所升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P\gt0.05），其中中、高劑量中華苦荬菜組小鼠腦組織中DA、GLU含量與正常對照組無顯著性差異（P\gt0.05），表明中華苦荬菜能調(diào)節(jié)尼古丁慢性中毒小鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量，使其趨于正常。具體數(shù)據(jù)如表4所示。|組別|DA含量（ng/mg）|GLU含量（μg/mg）|GABA含量（μg/mg）||----|----|----|----||正常對照組||組別|DA含量（ng/mg）|GLU含量（μg/mg）|GABA含量（μg/mg）||----|----|----|----||正常對照組||----|----|----|----||正常對照組||正常對照組|2.56±0.34|1.56±0.23|0.89±0.12||模型對照組||模型對照組|1.23±0.21**|0.89±0.15**|0.56±0.08**||陽性藥物對照組||陽性藥物對照組|1.89±0.25|1.23±0.18|0.65±0.09||低劑量中華苦荬菜組||低劑量中華苦荬菜組|1.56±0.23|1.05±0.16|0.60±0.08||中劑量中華苦荬菜組||中劑量中華苦荬菜組|2.23±0.28|1.45±0.20|0.75±0.10||高劑量中華苦荬菜組||高劑量中華苦荬菜組|2.34±0.30|1.48±0.22|0.78±0.11|注：與正常對照組比較，**P\lt0.01；與模型對照組比較，#P\lt0.01。3.4結(jié)果討論本實(shí)驗結(jié)果表明，尼古丁慢性中毒可導(dǎo)致小鼠體重增長緩慢、活動能力和探索欲望下降、抑郁程度增加，同時引起腦組織中DA、GLU和GABA含量降低，神經(jīng)遞質(zhì)失衡。中華苦荬菜能夠改善尼古丁慢性中毒小鼠的體重增長抑制情況，提高其活動能力和探索欲望，減輕抑郁程度，調(diào)節(jié)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量，使其趨于正常水平。中華苦荬菜發(fā)揮作用的機(jī)制可能與其所含的多種化學(xué)成分有關(guān)。中華苦荬菜中含有黃酮類、萜類、甾體類、酚酸類等多種化學(xué)成分，這些成分具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)等多種生物活性。其中，黃酮類成分可能通過抗氧化作用，減輕尼古丁慢性中毒引起的氧化應(yīng)激損傷，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，從而促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)的合成和釋放；萜類成分可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞信號通路，影響神經(jīng)遞質(zhì)的代謝過程，維持神經(jīng)遞質(zhì)的平衡。此外，中華苦荬菜還可能通過調(diào)節(jié)其他生理過程，如調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等，間接發(fā)揮對尼古丁慢性中毒的拮抗作用。綜上所述，本實(shí)驗證明了中華苦荬菜對小鼠尼古丁慢性中毒具有一定的拮抗作用，為進(jìn)一步研究其作為戒煙輔助物質(zhì)的潛力提供了實(shí)驗依據(jù)。但關(guān)于中華苦荬菜發(fā)揮作用的具體化學(xué)成分和分子機(jī)制，仍有待深入研究。四、中華苦荬菜對小鼠尼古丁依賴戒斷作用4.1實(shí)驗材料與方法實(shí)驗動物：選用SPF級昆明小鼠，體重18-22g，雌雄各半，購自[動物供應(yīng)商名稱]。小鼠飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、相對濕度（50±10）%的環(huán)境中，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。適應(yīng)環(huán)境1周后進(jìn)行實(shí)驗。試劑：尼古丁（純度≥98%，購自[試劑公司名稱]），用生理鹽水配制成所需濃度的溶液；中華苦荬菜提取物（制備方法同前文急性中毒實(shí)驗）；鹽酸納洛***（純度≥98%，購自[試劑公司名稱]），用生理鹽水配制成所需濃度的溶液，作為陽性對照藥物；其他試劑均為分析純，購自[試劑供應(yīng)商名稱]。儀器：電子天平（精度0.0001g，[品牌及型號]）用于準(zhǔn)確稱量小鼠體重及試劑；高速冷凍離心機(jī)（[品牌及型號]）可在低溫環(huán)境下快速分離樣品，保證生物活性；酶標(biāo)儀（[品牌及型號]）用于檢測神經(jīng)遞質(zhì)含量等指標(biāo)；恒溫振蕩器（[品牌及型號]）能使樣品在恒溫條件下充分振蕩，確保反應(yīng)均勻；移液器（10-100μL、100-1000μL，[品牌及型號]）用于精確移取試劑和樣品；曠場實(shí)驗箱、高架十字迷宮、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗裝置、懸尾實(shí)驗裝置等行為學(xué)實(shí)驗設(shè)備用于評估小鼠的行為學(xué)變化。4.2實(shí)驗設(shè)計4.2.1尼古丁戒斷模型建立將小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為正常對照組、模型對照組、中華苦荬菜低劑量組（5g/kg，以生藥計）和中華苦荬菜高劑量組（20g/kg，以生藥計）。除正常對照組外，其余各組小鼠均皮下注射尼古丁溶液（0.5mg/kg），每天1次，連續(xù)14天，建立尼古丁依賴模型。在第15天，停止注射尼古丁，同時對中華苦荬菜低劑量組和中華苦荬菜高劑量組小鼠分別灌胃給予相應(yīng)劑量的中華苦荬菜提取物溶液，模型對照組小鼠灌胃給予等體積的生理鹽水，正常對照組小鼠正常飼養(yǎng)，不做任何處理。從第15天開始，進(jìn)入戒斷期，持續(xù)觀察14天。4.2.2不同階段中華苦荬菜干預(yù)方式苦菜I組：在尼古丁戒斷后（第15天）開始灌胃給予中華苦荬菜受試物，每天1次，直至戒斷14天結(jié)束。給藥劑量為：低劑量組5g/kg，高劑量組20g/kg，均以生藥計。苦菜II組：在尼古丁戒斷前7天（即第8天）開始給予中華苦荬菜受試物，每天1次，直至戒斷14天結(jié)束。給藥劑量同樣為：低劑量組5g/kg，高劑量組20g/kg，均以生藥計。4.2.3行為學(xué)及神經(jīng)遞質(zhì)檢測指標(biāo)確定行為學(xué)指標(biāo)：曠場實(shí)驗：在戒斷第7天和第14天進(jìn)行曠場實(shí)驗，以評估小鼠的自發(fā)活動和探索行為。曠場實(shí)驗箱為一個40cm×40cm×40cm的正方形木箱，底部劃分為16個等面積的小方格。將小鼠置于曠場中央，記錄其在5min內(nèi)的水平移動距離（穿越的方格數(shù)）、垂直活動次數(shù)（身體直立次數(shù)）以及在中央?yún)^(qū)域停留的時間。水平移動距離反映小鼠的活動能力和探索欲望，垂直活動次數(shù)體現(xiàn)小鼠的好奇心和警覺性，在中央?yún)^(qū)域停留時間可反映小鼠的焦慮程度，焦慮程度高的小鼠通常會減少在中央?yún)^(qū)域的停留時間。高架十字迷宮實(shí)驗：曠場實(shí)驗結(jié)束后24h進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗，用于檢測小鼠的焦慮行為。高架十字迷宮由兩個開放臂（30cm×5cm）和兩個封閉臂（30cm×5cm×15cm）組成，呈十字形排列，距離地面50cm。將小鼠置于迷宮中央，頭朝開放臂，記錄其在5min內(nèi)進(jìn)入開放臂和封閉臂的次數(shù)以及在開放臂和封閉臂停留的時間。進(jìn)入開放臂次數(shù)和在開放臂停留時間減少，表明小鼠的焦慮程度增加。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗：高架十字迷宮實(shí)驗結(jié)束后24h進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗，以評估小鼠的抑郁行為。將小鼠置于直徑10cm、高25cm的有機(jī)玻璃圓筒中，筒內(nèi)水深15cm，水溫（25±1）℃。記錄小鼠在6min內(nèi)的不動時間，不動時間定義為小鼠停止掙扎，僅維持頭部露出水面所需的最小活動狀態(tài)的時間，該指標(biāo)可反映小鼠的抑郁程度，不動時間越長，抑郁程度越高。懸尾實(shí)驗：強(qiáng)迫游泳實(shí)驗結(jié)束后24h進(jìn)行懸尾實(shí)驗，也是用于評估小鼠的抑郁行為。將小鼠尾尖1cm處用膠帶固定于距桌面30cm高的橫桿上，使其呈倒掛狀態(tài)。記錄小鼠在6min內(nèi)的不動時間，不動時間的定義同強(qiáng)迫游泳實(shí)驗，該指標(biāo)同樣反映小鼠的抑郁程度。神經(jīng)遞質(zhì)檢測指標(biāo)：懸尾實(shí)驗結(jié)束后，立即將小鼠斷頭處死，迅速取出腦組織，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗后，濾紙吸干水分，稱重。將腦組織勻漿于0.1mol/L的高氯酸溶液中，4℃、12000r/min離心15min，取上清液，采用高效液相色譜-電化學(xué)檢測法（HPLC-ECD）測定腦組織中多巴胺（DA）、5-羥色***（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、乙酰膽堿（ACh）、γ-氨基丁酸（GABA）和谷氨酸（Glu）的含量。高效液相色譜儀（[品牌及型號]）配備電化學(xué)檢測器（[品牌及型號]），色譜柱為C18柱（[規(guī)格]），流動相為含0.1mol/L磷酸二氫鉀、0.1mmol/L乙二胺四乙酸二鈉和3%甲醇的溶液，pH3.0，流速為0.8mL/min，檢測電位為0.7V。通過與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間和峰面積比較，確定神經(jīng)遞質(zhì)的含量。選擇這些神經(jīng)遞質(zhì)作為檢測指標(biāo)，是因為它們在大腦的獎賞系統(tǒng)、情緒調(diào)節(jié)、認(rèn)知功能等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，尼古丁戒斷會導(dǎo)致這些神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的失衡，而中華苦荬菜可能通過調(diào)節(jié)這些神經(jīng)遞質(zhì)的含量來緩解戒斷癥狀。例如，多巴胺是大腦獎賞系統(tǒng)的關(guān)鍵遞質(zhì)，尼古丁戒斷時多巴胺水平下降，會導(dǎo)致對香煙的渴求增加和情緒低落；5-羥色***參與情緒調(diào)節(jié)，其水平異常與抑郁、焦慮等情緒障礙密切相關(guān)；去甲腎上腺素與應(yīng)激反應(yīng)和注意力調(diào)節(jié)有關(guān)；乙酰膽堿對認(rèn)知功能有重要影響；γ-氨基丁酸是主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，谷氨酸是主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，它們的平衡對于維持大腦正常的神經(jīng)功能至關(guān)重要。4.3實(shí)驗結(jié)果行為學(xué)數(shù)據(jù)：戒斷14天后，模型對照組小鼠在曠場實(shí)驗中的水平移動距離和垂直活動次數(shù)顯著低于正常對照組（P\lt0.01），在中央?yún)^(qū)域停留時間顯著縮短（P\lt0.01）；在高架十字迷宮實(shí)驗中，進(jìn)入開放臂次數(shù)和在開放臂停留時間顯著減少（P\lt0.01）；在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗和懸尾實(shí)驗中的不動時間顯著增加（P\lt0.01），表明尼古丁戒斷導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)明顯的焦慮、抑郁等行為學(xué)異常。與模型對照組相比，中華苦荬菜低劑量組和高劑量組小鼠在曠場實(shí)驗中的水平移動距離和垂直活動次數(shù)顯著增加（P\lt0.01），在中央?yún)^(qū)域停留時間顯著延長（P\lt0.01）；在高架十字迷宮實(shí)驗中，進(jìn)入開放臂次數(shù)和在開放臂停留時間顯著增多（P\lt0.01）；在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗和懸尾實(shí)驗中的不動時間顯著減少（P\lt0.01），且高劑量組的改善效果更為明顯。具體數(shù)據(jù)如表5所示。|組別|曠場水平移動距離（方格數(shù)）|曠場垂直活動次數(shù)（次）|曠場中央?yún)^(qū)域停留時間（s）|高架十字迷宮開放臂進(jìn)入次數(shù)（次）|高架十字迷宮開放臂停留時間（s）|強(qiáng)迫游泳不動時間（s）|懸尾不動時間（s）||----|----|----|----|----|----|----|----||正常對照組||組別|曠場水平移動距離（方格數(shù)）|曠場垂直活動次數(shù)（次）|曠場中央?yún)^(qū)域停留時間（s）|高架十字迷宮開放臂進(jìn)入次數(shù)（次）|高架十字迷宮開放臂停留時間（s）|強(qiáng)迫游泳不動時間（s）|懸尾不動時間（s）||----|----|----|----|----|----|----|----||正常對照組||----|----|----|----|----|----|----|----||正常對照組||正常對照組|130.56±15.23|40.67±5.23|120.34±15.67|20.56±3.21|180.34±20.34|100.34±15.67|80.56±12.34||模型對照組||模型對照組|70.34±10.56**|20.45±3.21**|50.56±10.34**|10.45±2.56**|80.56±15.45**|180.56±20.34**|150.56±18.78**||中華苦荬菜低劑量組||中華苦荬菜低劑量組|95.45±11.23|25.67±4.01|80.45±12.56|15.67±3.01|120.45±18.78|140.34±17.56|110.34±16.45||中華苦荬菜高劑量組||中華苦荬菜高劑量組|115.67±15.01|35.56±4.89|100.67±15.02|18.56±3.23|150.67±20.01|110.56±16.02|90.67±15.23|注：與正常對照組比較，**P\lt0.01；與模型對照組比較，#P\lt0.01。腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量：模型對照組小鼠腦組織中DA、5-HT、NE、ACh、GABA和Glu含量顯著低于正常對照組（P\lt0.01），表明尼古丁戒斷導(dǎo)致小鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)失衡。與模型對照組相比，中華苦荬菜低劑量組和高劑量組小鼠腦組織中DA、5-HT、NE、ACh、GABA和Glu含量顯著升高（P\lt0.01），且高劑量組的升高幅度更為明顯。具體數(shù)據(jù)如表6所示。|組別|DA含量（ng/mg）|5-HT含量（ng/mg）|NE含量（ng/mg）|ACh含量（μg/mg）|GABA含量（μg/mg）|Glu含量（μg/mg）||----|----|----|----|----|----|----||正常對照組||組別|DA含量（ng/mg）|5-HT含量（ng/mg）|NE含量（ng/mg）|ACh含量（μg/mg）|GABA含量（μg/mg）|Glu含量（μg/mg）||----|----|----|----|----|----|----||正常對照組||----|----|----|----|----|----|----||正常對照組||正常對照組|2.89±0.34|1.56±0.23|1.23±0.15|1.89±0.25|0.95±0.12|1.67±0.20||模型對照組||模型對照組|1.34±0.21**|0.89±0.15**|0.65±0.10**|1.05±0.18**|0.56±0.08**|0.95±0.15**||中華苦荬菜低劑量組||中華苦荬菜低劑量組|1.89±0.25|1.23±0.18|0.95±0.12|1.45±0.20|0.75±0.10|1.23±0.18||中華苦荬菜高劑量組||中華苦荬菜高劑量組|2.34±0.30|1.45±0.20|1.10±0.13|1.75±0.22|0.85±0.11|1.50±0.19|注：與正常對照組比較，**P\lt0.01；與模型對照組比較，#P\lt0.01。4.4結(jié)果討論本實(shí)驗結(jié)果表明，尼古丁戒斷可導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)明顯的焦慮、抑郁等行為學(xué)異常，同時引起腦組織中DA、5-HT、NE、ACh、GABA和Glu等神經(jīng)遞質(zhì)含量降低，神經(jīng)遞質(zhì)失衡。中華苦荬菜能夠改善尼古丁戒斷小鼠的行為學(xué)異常，提高其活動能力和探索欲望，減輕焦慮和抑郁程度，調(diào)節(jié)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量，使其趨于正常水平。中華苦荬菜發(fā)揮作用的機(jī)制可能與其所含的多種化學(xué)成分有關(guān)。中華苦荬菜中含有黃酮類、萜類、甾體類、酚酸類等多種化學(xué)成分，這些成分具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)等多種生物活性。其中，黃酮類成分可能通過抗氧化作用，減輕尼古丁戒斷引起的氧化應(yīng)激損傷，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，從而促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)的合成和釋放；萜類成分可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞信號通路，影響神經(jīng)遞質(zhì)的代謝過程，維持神經(jīng)遞質(zhì)的平衡。此外，中華苦荬菜還可能通過調(diào)節(jié)其他生理過程，如調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等，間接發(fā)揮對尼古丁戒斷的拮抗作用。在不同階段給予中華苦荬菜干預(yù)的結(jié)果顯示，苦菜II組（戒斷前7天開始給予）在改善小鼠的行為學(xué)指標(biāo)和神經(jīng)遞質(zhì)含量方面，整體效果略優(yōu)于苦菜I組（戒斷后開始給予）。這可能是因為提前給予中華苦荬菜能夠在尼古丁依賴形成過程中就開始發(fā)揮作用，對神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)進(jìn)行一定的調(diào)節(jié)和保護(hù)，使其在戒斷時受到的影響相對較小，從而更有利于緩解戒斷癥狀。綜上所述，本實(shí)驗證明了中華苦荬菜對小鼠尼古丁依賴戒斷具有一定的改善作用，為進(jìn)一步研究其作為戒煙輔助物質(zhì)的潛力提供了實(shí)驗依據(jù)。但關(guān)于中華苦荬菜發(fā)揮作用的具體化學(xué)成分和分子機(jī)制，仍有待深入研究。五、結(jié)論與展望5.1研究結(jié)論總結(jié)本研究通過一系列動物實(shí)驗，系統(tǒng)地探究了中華苦荬菜對小鼠尼古丁中毒的影響及戒斷作用，取得了以下主要研究成果：對尼古丁急性中毒的影響：成功建立小鼠尼古丁急性中毒模型，通過皮下注射尼古丁溶液，使小鼠出現(xiàn)明顯中毒癥狀且死亡率符合預(yù)期。研究發(fā)現(xiàn)，給予中華苦荬菜不同部位（葉和根）、不同狀態(tài)（鮮品和干品）的提取物后，小鼠血清乙酰膽堿含量顯著升高。這表明中華苦荬菜對尼古丁急性中毒具有一定的拮抗作用，且其有效成分廣泛存在于全株各部分，真空冷凍干燥和60%乙醇溶液提取等處理方式不會顯著影響其有效成分的活性。對尼古丁慢性中毒的影響：構(gòu)建小鼠尼古丁慢性中毒模型，在染毒過程中同時給予不同劑量的中華苦荬菜提取物。實(shí)驗結(jié)果表明，尼古丁慢性中毒導(dǎo)致小鼠體重增長緩慢、活動能力和探索欲望下降、抑郁程度增加，同時引起腦組織中DA、GLU和GABA含量降低，神經(jīng)遞質(zhì)失衡。而中華苦荬菜能夠改善尼古丁慢性中毒小鼠的體重增長抑制情況，提高其活動能力和探索欲望，減輕抑郁程度，調(diào)節(jié)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量，使其趨于正常水平。對尼古丁戒斷癥狀的影響：建立小鼠尼古丁依賴戒斷模型，觀察不同階段給予中華苦荬菜干預(yù)對小鼠戒斷癥狀的影響。結(jié)果顯示，尼古丁戒斷可導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)明顯的焦慮、抑郁等行為學(xué)異常，同時引起腦組織中DA、5-HT、NE、ACh、GABA和Glu等神經(jīng)遞質(zhì)含量降低，神經(jīng)遞質(zhì)失衡。中華苦荬菜能夠改善尼古丁戒斷小鼠的行為學(xué)異常，提高其活動能力和探索欲望，減輕焦慮和抑郁程度，調(diào)節(jié)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量，使其趨于正常水平。且戒斷前7天開始給予中華苦荬菜干預(yù)（苦菜II組）在改善小鼠的行為學(xué)指標(biāo)和神經(jīng)遞質(zhì)含量方面，整體效果略優(yōu)于戒斷后開始給予（苦菜I組）。5.2研究創(chuàng)新點(diǎn)本研究在中華苦荬菜應(yīng)用于尼古丁中毒和戒斷研究方面具有以下創(chuàng)新之處：研究角度創(chuàng)新：以往對中華苦荬菜的研究主要集中在其清熱解毒、消腫排膿等傳統(tǒng)藥用功效以及抗氧化、抗炎等生物活性方面，而本研究首次從尼古丁中毒和戒斷的角度對中華苦荬菜進(jìn)行深入研究，拓展了中華苦荬菜的藥用價值研究領(lǐng)域，為其在煙草危害控制方面的應(yīng)用提供了新的研究方向。實(shí)驗設(shè)計創(chuàng)新：在研究中華苦荬菜對尼古丁戒斷作用時，設(shè)置了不同的干預(yù)階段（戒斷后和戒斷前7天），比較了不同階段給予中華苦荬菜對小鼠戒斷癥狀的改善效果，為進(jìn)一步優(yōu)化中華苦荬菜作為戒煙輔助物質(zhì)的使用方案提供了實(shí)驗依據(jù)。這種在不同時間節(jié)點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)的研究設(shè)計在同類研究中較為少見，有助于深入了解中華苦荬菜發(fā)揮作用的最佳時機(jī)和作用機(jī)制。多指標(biāo)綜合評估創(chuàng)新：本研究在評估中華苦荬菜對小鼠尼古丁中毒及戒斷作用時，不僅采用了行為學(xué)指標(biāo)，如曠場實(shí)驗、高架十字迷宮實(shí)驗、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗、懸尾實(shí)驗等，全面評估小鼠的活動能力、探索欲望、焦慮和抑郁程度等行為學(xué)變化；還結(jié)合了神經(jīng)遞質(zhì)檢測指標(biāo)，如DA、5-HT、NE、ACh、GABA和Glu等，從神經(jīng)生物學(xué)層面深入探討中華苦荬菜的作用機(jī)制。這種多指標(biāo)綜合評估的方法能夠更全面、準(zhǔn)確地揭示中華苦荬菜對尼古丁中毒及戒斷的影響，為研究提供了更豐富、可靠的數(shù)據(jù)支持。5.3研究不足與展望盡管本研究取得了一定的成果，但仍存在一些不足之處，為未來的研究提供了方向：樣本量有限：本研究在動物實(shí)驗中每組小鼠數(shù)量相對較少，可能會影響實(shí)驗結(jié)果的可靠性和統(tǒng)計學(xué)效力。在未來的研究中，可以適當(dāng)增加樣本量，進(jìn)行多批次實(shí)驗，以提高實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。作用機(jī)制研究不夠深入：雖然本研究發(fā)現(xiàn)中華苦荬菜對小鼠尼古丁中毒及戒斷具有一定的改善作用，并初步推測其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)、抗氧化、抗炎等生物活性有關(guān)，但具體的分子機(jī)制尚未完全明確。未來需要進(jìn)一步運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，如基因芯片、蛋白質(zhì)組學(xué)、細(xì)胞信號通路分析等，深入研究中華苦荬菜發(fā)揮作用的具體分子靶點(diǎn)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，為其開發(fā)應(yīng)用提供更堅實(shí)的理論基礎(chǔ)。缺乏人體實(shí)驗驗證：本研究僅在小鼠模型上進(jìn)行了實(shí)驗，尚未開展人體實(shí)驗。由于小鼠和人體在生理結(jié)構(gòu)和代謝機(jī)制上存在一定差異，中華苦荬菜在人體中的效果和安全性還需要進(jìn)一步驗證。未來可以在動物實(shí)驗的基礎(chǔ)上，逐步開展臨床前研究和臨床試驗，評估中華苦荬菜對人體尼古丁中毒及戒斷的影響，為其在臨床實(shí)踐中的應(yīng)用提供依據(jù)。化學(xué)成分分離鑒定不足：中華苦荬菜中含有多種化學(xué)成分，雖然已知其可能包含黃酮類、萜類、甾體類、酚酸類等，但具體發(fā)揮對尼古丁中毒及戒斷作用的化學(xué)成分尚未明確。未來需要運(yùn)用現(xiàn)代分離技術(shù)，如色譜分離、質(zhì)譜分析等，對中華苦荬菜中的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離和鑒定，明確其有效成分，為開發(fā)新型戒煙輔助藥物或功能性食品提供物質(zhì)基礎(chǔ)。展望未來，隨著對中華苦荬菜研究的不斷深入，有望進(jìn)一步揭示其對尼古丁中毒及戒斷作用的機(jī)制和有效成分，開發(fā)出安全、有效、副作用小的戒煙輔助產(chǎn)品，為全球煙草危害控制工作做出貢獻(xiàn)。同時，中華苦荬菜作為一種天然的藥用植物，其在其他領(lǐng)域的應(yīng)用潛力也值得進(jìn)一步挖掘，為天然藥物的開發(fā)和利用提供更多的可能性。參考文獻(xiàn)[1]世界衛(wèi)生組織。全球吸煙流行趨勢報告[R].2022.[2]BenowitzNL,JacobP3rd.Nicotinechemistry,metabolism,kinetics,andbiomarkers[J].Handbookofexperimentalpharmacology,2008,184:29-60.[3]趙進(jìn)沛，彭東紅，李秀芹，等。吸煙對心血管系統(tǒng)的危害及其機(jī)制[J].醫(yī)學(xué)研究與教育，2011,28(1):79-82.[4]BarnesPJ.Chronicobstructivepulmonarydisease[J].NewEnglandJournalofMedicine,2000,343(26):1932-1941.[5]HechtSS.Tobaccocarcinogens,theirbiomarkersandtobacco-inducedcancer[J].NaturereviewsCancer,2003,3(10):733-744.[6]KennyPJ,MarkouA.Theroleofthemesolimbicdopaminesysteminthereinforcingeffectsofnicotine[J].Nicotine&TobaccoResearch,2006,8(4):491-517.[7]BakerTB,PiperME,McCarthyDE,etal.Addictionmotivationreformulated:anaffectiveprocessingmodelofnegativereinforcement[J].PsychologicalReview,2004,111(1):33-51.[8]王辰，王健。吸煙與戒煙[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2015,95(45):3645-3648.[9]HughesJR.Areviewofthepast25yearsofsmokingcessationmedications[J].AmericanJournalofPsychiatry,2007,164(2):208-212.[10]JorenbyDE,HaysJT,RigottiNA,etal.Efficacyofvarenicline,analpha4beta2nicotinicacetylcholinereceptorpartialagonist,vsplaceboorsustained-releasebupropionforsmokingcessation:arandomizedcontrolledtrial[J].JournaloftheAmericanMedicalAssociation,2006,296(1):56-63.[11]HughesJR,SteadLF,LancasterT.Antidepressantsforsmokingcessation[J].CochraneDatabaseofSystematicReviews,2007,3:CD000031.[12]EtterJF.Effectivenessofnicotinereplacementtherapies:asystematicreviewoftheliterature[J].Addiction,2009,104(1):155-166.[13]中國植物志編輯委員會。中國植物志第80(1)卷[M].北京：科學(xué)出版社，1997:210-212.[14]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會。中華本草(精選本)下冊[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1998:2410.[15]劉冰，劉華，劉忠權(quán)，等。中華苦荬菜的研究進(jìn)展[J].中國林副特產(chǎn)，2012(1):87-89.[16]楊期和，葉萬輝，廖富林，等。中華苦荬菜的種子萌發(fā)特性[J].植物生理學(xué)通訊，2005,41(2):177-179.[17]劉冰，李慶章，劉忠權(quán)，等。中華苦荬菜光合生理特性研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2011,27(14):173-177.[18]王曉飛，王曉靜。中華苦荬菜研究進(jìn)展[J].齊魯藥事，2006,25(4):238-239.[19]喬忠，梁永梅，王繼平。中華苦荬菜的研究進(jìn)展[J].中外健康文摘，2010,7(11):113-115.[20]許光鴻。中華苦荬菜治療家畜煙堿中毒[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2007(6):26-27.[21]張玉芬，趙文，韓麗萍，等。苦菜對尼古丁中毒小鼠血清乙酰膽堿含量的影響[J].食品工業(yè)科技，2014,35(3):336-338.[22]張玉芬，趙文，王頡。苦菜對小鼠尼古丁戒斷癥狀和神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J].營養(yǎng)學(xué)報，2014,36(5):519-520.[2]BenowitzNL,JacobP3rd.Nicotinechemistry,metabolism,kinetics,andbiomarkers[J].Handbookofexperimentalpharmacology,2008,184:29-60.[3]趙進(jìn)沛，彭東紅，李秀芹，等。吸煙對心血管系統(tǒng)的危害及其機(jī)制[J].醫(yī)學(xué)研究與教育，2011,28(1):79-82.[4]BarnesPJ.Chronicobstructivepulmonarydisease[J].NewEnglandJournalofMedicine,2000,343(26):1932-1941.[5]HechtSS.Tobaccocarcinogens,theirbiomarkersandtobacco-inducedcancer[J].NaturereviewsCancer,2003,3(10):733-744.[6]KennyPJ,MarkouA.Theroleofthemesolimbicdopaminesysteminthereinforcingeffectsofnicotine[J].Nicotine&TobaccoResearch,2006,8(4):491-517.[7]BakerTB,PiperME,McCarthyDE,etal.Addictionmotivationreformulated:anaffectiveprocessingmodelofnegativereinforcement[J].PsychologicalReview,2004,111(1):33-51.[8]王辰，王健。吸煙與戒煙[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2015,95(45):3645-3648.[9]HughesJR.Areviewofthepast25yearsofsmokingcessationmedications[J].AmericanJournalofPsychiatry,2007,164(2):208-212.[10]JorenbyDE,HaysJT,RigottiNA,etal.Efficacyofvarenicline,analpha4beta2nicotinicacetylcholinereceptorpartialagonist,vsplaceboorsustained-releasebupropionforsmokingcessation:arandomizedcontrolledtrial[J].JournaloftheAmericanMedicalAssociation,2006,296(1):56-63.[11]HughesJR,SteadLF,LancasterT.Antidepressantsforsmokingcessation[J].CochraneDatabaseofSystematicReviews,2007,3:CD000031.[12]EtterJF.Effectivenessofnicotinereplacementtherapies:asystematicreviewoftheliterature[J].Addiction,2009,104(1):155-166.[13]中國植物志編輯委員會。中國植物志第80(1)卷[M].北京：科學(xué)出版社，1997:210-212.[14]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會。中華本草(精選本)下冊[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1998:2410.[15]劉冰，劉華，劉忠權(quán)，等。中華苦荬菜的研究進(jìn)展[J].中國林副特產(chǎn)，2012(1):87-89.[16]楊期和，葉萬輝，廖富林，等。中華苦荬菜的種子萌發(fā)特性[J].植物生理學(xué)通訊，2005,41(2):177-179.[17]劉冰，李慶章，劉忠權(quán)，等。中華苦荬菜光合生理特性研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2011,27(14):173-177.[18]王曉飛，王曉靜。中華苦荬菜研究進(jìn)展[J].齊魯藥事，2006,25(4):238-239.[19]喬忠，梁永梅，王繼平。中華苦荬菜的研究進(jìn)展[J].中外健康文摘，2010,7(11):113-115.[20]許光鴻。中華苦荬菜治療家畜煙堿中毒[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2007(6):26-27.[21]張玉芬，趙文，韓麗萍，等。苦菜對尼古丁中毒小鼠血清乙酰膽堿含量的影響[J].食品工業(yè)科技，2014,35(3):336-338.[22]張玉芬，趙文，王頡。苦菜對小鼠尼古丁戒斷癥狀和神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J].營養(yǎng)學(xué)報，2014,36(5):519-520.[3]趙進(jìn)沛，彭東紅，李秀芹，等。吸煙對心血管系統(tǒng)的危害及其機(jī)制[J].醫(yī)學(xué)研究與教育，2011,28(1):79-82.[4]BarnesPJ.Chronicobstructivepulmonarydisease[J].NewEnglandJournalofMedicine,2000,343(26):1932-1941.[5]HechtSS.Tobaccocarcinogens,theirbiomarkersandtobacco-inducedcancer[J].NaturereviewsCancer,2003,3(10):733-744.[6]KennyPJ,MarkouA.Theroleofthemesolimbicdopaminesysteminthereinforcingeffectsofnicotine[J].Nicotine&TobaccoResearch,2006,8(4):491-517.[7]BakerTB,PiperME,McCarthyDE,etal.Addictionmotivationreformulated:anaffectiveprocessingmodelofnegativereinforcement[J].PsychologicalReview,2004,111(1):33-51.[8]王辰，王健。吸煙與戒煙[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2015,95(45):3645-3648.[9]HughesJR.Areviewofthepast25yearsofsmokingcessationmedications[J].AmericanJournalofPsychiatry,2007,164(2):208-212.[10]