FISH檢測題目及答案

FISH檢測題目及答案考試時間：______分鐘總分：______分姓名：______一、選擇題（每題4分，共20分）1.以下哪種探針類型常用于檢測染色體微缺失綜合征？A.著絲粒探針B.重復序列探針C.單一序列探針（locus-specificprobe）D.涂染探針（paintingprobe）2.FISH技術中，常用的熒光標記物不包括以下哪一項？A.FITCB.TRITCC.DAPID.PCR3.在FISH樣本制備中，蛋白酶K消化的主要目的是什么？A.去除細胞膜B.暴露靶DNAC.滅活內源性酶D.增加樣本黏性4.對于HER2基因FISH檢測，判讀HER2基因擴增的標準是？A.HER2/CEP17比值≥2.0B.HER2信號數/細胞≥4C.HER2/CEP17比值≥2.1D.CEP17信號數/細胞≤25.以下哪項是導致FISH檢測假陽性的常見原因？A.樣本過度消化B.探針濃度過高C.洗脫不充分D.雜交溫度過低二、名詞解釋（每題5分，共15分）1.熒光淬滅（FluorescenceQuenching）2.探針變性（ProbeDenaturation）3.內對照（InternalControl）三、簡答題（每題10分，共30分）1.簡述FISH檢測樣本制備中“組織切片預處理”的步驟及目的。2.分析FISH檢測中假陽性的可能原因及解決措施。3.簡述FISH技術在產前診斷中的主要應用及檢測目標。四、案例分析題（35分）患者乳腺癌樣本行HER2FISH檢測，結果為：HER2基因信號數15個，CEP17（染色體17著絲粒）信號數3個。請判斷HER2基因狀態，說明判讀依據及臨床意義。試卷答案一、選擇題（每題4分，共20分）1.答案：C解析思路：單一序列探針（locus-specificprobe）針對特定基因區域，常用于檢測染色體微缺失綜合征；著絲粒探針用于染色體計數，重復序列探針用于重復區域，涂染探針用于整條染色體檢測，故C正確。2.答案：D解析思路：FITC、TRITC、DAPI是常用熒光標記物；PCR是一種擴增技術，非熒光標記物，故D不包括。3.答案：B解析思路：蛋白酶K消化用于消化蛋白質，暴露靶DNA；去除細胞膜是其他步驟，滅活內源性酶非主要目的，增加樣本黏性不相關，故B正確。4.答案：C解析思路：HER2基因擴增標準為HER2/CEP17比值≥2.1；HER2信號數/細胞≥4是次要標準，但比值優先；CEP17信號數/細胞≤2不直接相關，故C正確。5.答案：B解析思路：假陽性常由探針濃度過高導致非特異性結合；樣本過度消化可能損傷DNA，洗脫不充分可能背景高，雜交溫度過低可能效率低，但B是直接原因，故B正確。二、名詞解釋（每題5分，共15分）1.答案：熒光淬滅（FluorescenceQuenching）指熒光分子在激發光或環境因素影響下，熒光強度減弱或消失的現象。解析思路：定義熒光淬滅，解釋其發生機制（如光漂白、化學物質）和后果（信號無法檢測）。2.答案：探針變性（ProbeDenaturation）指雙鏈DNA探針加熱解離成單鏈的過程，以利于與靶DNA雜交。解析思路：說明變性在FISH中的作用（使探針單鏈化），并提及溫度控制（通常75-80°C）。3.答案：內對照（InternalControl）指已知狀態的探針，用于驗證實驗有效性，如染色體著絲粒探針。解析思路：解釋內對照目的（確保樣本質量和雜交效率），舉例如CEP17探針。三、簡答題（每題10分，共30分）1.答案：步驟：①脫蠟（二甲苯）；②水化（梯度乙醇）；③蛋白酶K消化；④乙醇脫水。目的：去除石蠟、暴露靶DNA、增強探針滲透性，確保雜交效率。解析思路：列出步驟并解釋每一步目的，強調蛋白酶K消化暴露DNA的關鍵作用。2.答案：可能原因：樣本降解、探針濃度過高、洗脫不充分、雜交溫度不當、背景干擾。解決措施：優化樣本制備、調整探針濃度、嚴格洗脫步驟、控制雜交溫度、使用適當對照。解析思路：分析假陽性原因，針對性給出解決措施，確保邏輯連貫。3.答案：應用：檢測染色體非整倍體（如21三體）、微缺失綜合征。檢測目標：常見染色體數目異常（如T21、T18、T13）和特定基因缺失（如22q11.2）。解析思路：簡述產前診斷應用，列出檢測目標染色體和疾病，覆蓋核心內容。四、案例分析題（35分）答案：判讀結果：HER2基因擴增。判讀依據：HER2/CEP17比值=15/3=5.0（≥2.1為擴增）；平均HER2信號數/細