臨床兒童測梅毒檢測方法、TRUST與TPPA試驗(yàn)特點(diǎn)及意義

臨床兒童測梅毒檢測方法、TRUST與TPPA試驗(yàn)特點(diǎn)及意義梅毒螺旋體（TP)屬于密螺旋體屬蒼白螺旋體中的蒼白亞種，是引起人類梅毒的病原體。近年來梅毒發(fā)病率呈逐年上升趨勢。在病程的不同階段有不同的臨床癥狀，梅毒的病程分為3個(gè)時(shí)期。一期梅毒：主要癥狀是在入侵部位發(fā)生硬下疳，潛伏期一般為2~4周，當(dāng)機(jī)體對其發(fā)生免疫反應(yīng)時(shí)，下疳消失。腹股溝或皮損近衛(wèi)淋巴結(jié)腫大。二期梅毒：TP隨血液循環(huán)播散，表現(xiàn)為皮膚粘膜損害，全身淺表淋巴結(jié)可腫大，此時(shí)梅毒螺旋體在體內(nèi)大量繁殖。三期梅毒：梅毒螺旋體會侵入到神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)造成極大損害，同時(shí)在多個(gè)器官會產(chǎn)生樹膠腫，此階段傳染性不強(qiáng)，且機(jī)體內(nèi)梅毒數(shù)量極少，不易檢測到。絕大多數(shù)梅毒螺旋體感染是通過性途徑傳播的，也可以通過輸入梅毒螺旋體的傳染性血液制品而感染。神經(jīng)梅毒可出現(xiàn)在梅毒的早期和晚期，如果沒有及時(shí)合理的治療，梅毒將發(fā)展為多個(gè)階段。因此，梅毒疾病的早期檢測對于控制梅毒傳播和及時(shí)治療具有重要意義。梅毒螺旋體檢測方法目前臨床實(shí)踐中，梅毒螺旋體實(shí)驗(yàn)室診斷主要采用病原學(xué)和血清學(xué)兩種。病原學(xué)檢查梅毒螺旋體的結(jié)果最直接，包括暗視野顯微鏡法(DFM)、直接免疫熒光試驗(yàn)(DFA)、自動聚焦顯微鏡(FFM)等方法。

梅毒螺旋體很難在體外培養(yǎng)，所以其診斷主要為血清學(xué)檢測，包括特異性抗體和非特異性抗體檢測。人體感染梅毒螺旋體后，體內(nèi)會產(chǎn)生兩種抗體：一種是特異性抗梅毒抗體（IgM、IgG抗體），一種是非特異性抗心磷脂抗體。根據(jù)人體感染梅毒螺旋體后外周血清出現(xiàn)的非特異性抗體與特異性抗體，將梅毒血清檢測方法分為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)與梅毒特異性抗體檢測。其中，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)有甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）、性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）、快速血漿反應(yīng)素紙片試驗(yàn)(RPR)、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(USR)，是以心磷脂為抗原，對待檢樣本中是否出現(xiàn)抗心磷脂抗體進(jìn)行檢測；梅毒特異性抗體檢測有梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA），熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)和重組免疫印跡法等，以梅毒螺旋體的成分為抗原，對待檢樣本中的抗梅毒螺旋體抗體進(jìn)行檢測。

TRUST和TPPA是什么梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）：TPPA是梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)（TPHA）的改良版，用玫瑰紅色的明膠顆粒替換了TPHA中使用的紅細(xì)胞，使結(jié)果更易于肉眼觀察。TPPA使用雙抗體夾心法，因此具有較高的敏感性與特異性，是目前國內(nèi)外公認(rèn)的梅毒血清確認(rèn)試驗(yàn)。TPPA單獨(dú)陽性只能說明在感染或曾經(jīng)感染過，而不能判斷梅毒活動與否。當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后，體內(nèi)便會終身有抗體存在，使用該方法對患者進(jìn)行檢測不會受治療方法、病情發(fā)展及干預(yù)措施等因素的影響，檢測結(jié)果有良好的穩(wěn)定性，假陽性較少，對各期梅毒的檢出率都較高。TPPA可在臨床實(shí)踐中快速診斷梅毒，從樣品處理到結(jié)果只需約120min,不需要特殊設(shè)備的配合，但是，該方法自動化檢測的難度較高，無法儲存原始數(shù)據(jù)，需檢驗(yàn)人員用肉眼進(jìn)行觀察，當(dāng)樣本數(shù)量較多時(shí)，便難以實(shí)現(xiàn)批量篩查，不僅操作步驟煩瑣，而且所花時(shí)間較長，難以達(dá)到快速檢測的目的，不適合用于大規(guī)模篩選性檢測。TPPA試劑盒價(jià)格高昂，也一定程度上限制了其在基層醫(yī)院的推廣使用。

甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）：TRUST法所用的抗原為心磷脂，其可經(jīng)對抗心磷脂抗體檢查判斷患者是否發(fā)生梅毒，此法操作較為簡便，價(jià)格低廉，易被患者接受，其滴度變化與梅毒治療情況呈正相關(guān)，即隨著梅毒的治愈，抗體滴度下降，可用于監(jiān)測患者病情變化與療效評估。但人體感染TP4~8周血清內(nèi)才會出現(xiàn)一定數(shù)量的非特異性抗體和特異性抗體，而治療后非特異性抗體會轉(zhuǎn)化為陰性，降低TRUST檢測的敏感性，不適用于潛伏期和Ⅰ期、Ⅲ期梅毒檢查，當(dāng)患者處于梅毒螺旋體感染的早期或潛伏期，使用該方法檢測時(shí)若非特異性抗體滴度不足，難以檢測出陽性，便會出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，誤診、漏診風(fēng)險(xiǎn)較大。TRUST法影響因素比較多，磷脂存在于機(jī)體所有細(xì)胞中，非梅毒性疾病也可產(chǎn)生類脂體抗體與磷脂抗原反應(yīng)產(chǎn)生梅毒血清生物學(xué)假陽性。免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、麻風(fēng)、混合結(jié)締組織病等都會引起假陽性。

梅毒檢測結(jié)果臨床意義表1梅毒診斷的兩種血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果及意義

表2.不同分期梅毒的血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)結(jié)果TRUST陽性，TPPA陽性需結(jié)合患者流行病史、臨床癥狀，基本可以診斷梅毒，說明正在感染梅毒，具有較強(qiáng)傳染性。梅毒處理的一般原則為：及早發(fā)現(xiàn)，及時(shí)正規(guī)治療，越早治療效果越好；劑量足夠，療程規(guī)則，不規(guī)則治療可增加復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)及促使晚期梅毒損害提前發(fā)生；治療后要經(jīng)過足夠時(shí)間的追蹤觀察（包括全身體檢和復(fù)查非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)滴度）；所有梅毒患者均應(yīng)做HIV咨詢和檢測；患者所有性伴應(yīng)同時(shí)進(jìn)行檢查和相應(yīng)治療。

2.TRUST陽性，TPPA陰性

①TRUST滴度很高，如果TRUST滴度達(dá)到1:32以上，基本可以診斷是梅毒，建議復(fù)查TPPA，并要進(jìn)行足量規(guī)則治療，并定期隨訪3年。

②TRUST滴度比較低，根據(jù)近期是否有不安全性行為、多性伴或性伴侶感染史、或輸血史等情況而定，如果沒有以上情況，可以定期隨訪復(fù)查。

3.TRUST陰性，TPPA陽性

①如果既往感染過梅毒但是未治療過，此時(shí)可能已轉(zhuǎn)為潛伏梅毒，建議進(jìn)行足量規(guī)則治療，并定期隨訪3年。

②如果以前感染過梅毒并且正規(guī)治療過，但是沒有經(jīng)過正規(guī)的3年定期隨訪觀察，建議復(fù)查隨訪一段時(shí)間。若未正規(guī)治療過，建議進(jìn)行足量規(guī)則治療，并且定期隨訪3年。

③如果對以前是否感染過梅毒未知，建議進(jìn)行足量規(guī)則治療，并且定期隨訪3年。需要注意，少數(shù)患者在正規(guī)抗梅治療后，非梅毒螺旋體抗體滴度下降至一定程度后不再下降，且長期維持在某一滴度范圍，這種現(xiàn)象稱為血清固定現(xiàn)象。對于血清固定