標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 35942-2018 隱孢子蟲套式PCR檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)范隱孢子蟲的分子生物學(xué)檢測流程。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了使用套式PCR技術(shù)對環(huán)境樣本中的隱孢子蟲進(jìn)行定性分析的方法。套式PCR是一種兩步或多步擴(kuò)增過程，通過第一次PCR反應(yīng)放大目標(biāo)DNA片段后，再以第一次PCR產(chǎn)物作為模板進(jìn)行第二次或更多次PCR擴(kuò)增，從而提高檢測靈敏度和特異性。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，首先需要從待測樣品中提取總DNA，然后設(shè)計針對隱孢子蟲特定基因區(qū)域的引物對。標(biāo)準(zhǔn)中推薦了內(nèi)外兩套引物組合，其中外引物用于第一輪PCR擴(kuò)增，內(nèi)引物則應(yīng)用于第二輪擴(kuò)增。整個實驗過程中需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免污染，并且每一步驟都應(yīng)設(shè)置陽性對照與陰性對照以確保結(jié)果準(zhǔn)確性。


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....

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  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35942—2018

隱孢子蟲套式PCR檢測方法

NestedPCRmethodfordetectionofCryptosporidiumspp

.

2018-02-06發(fā)布2018-09-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T35942—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人陳兆國米榮升黃燕劉陸世王巖

:、、、、。

Ⅰ

GB/T35942—2018

隱孢子蟲套式PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了隱孢子蟲套式檢測方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物的隱孢子蟲感染的檢測流行病學(xué)調(diào)查和出入境檢驗檢疫

、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的應(yīng)用

WS/T230—2002(PCR)

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(PolymeraseChainReaction)。

磷酸鹽緩沖液

PBS:(PhosphateBufferedSaline)。

乙酸電泳緩沖液

TAE:Tris-(TrisAcetate-EDTABuffer)。

溴化乙錠

EB:(EthidiumBromide)。

牛血清白蛋白

BSA:(BovineSerumAlbumin)。

4儀器材料與試劑

、

41儀器

.

411基因擴(kuò)增儀

..PCR。

412高速臺式冷凍離心機(jī)

..。

413低速大容量離心機(jī)

..。

414微量可調(diào)移液器

..:2μL、10μL、20μL、200μL、1000μL。

415核酸電泳儀

..。

416核酸電泳槽

..。

417凝膠成像分析系統(tǒng)

..。

418生物樣品均質(zhì)研磨儀

..。

419高壓蒸汽滅菌器

..。

42材料

.

421一次性封口袋

..。

422棉

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