標準解讀

《GB/T 27621-2011 馬鼻肺炎病毒PCR檢測方法》是一項國家標準，專門針對馬鼻肺炎病毒（EHV）的聚合酶鏈反應（PCR）檢測方法進行了詳細規定。該標準適用于對疑似感染馬鼻肺炎病毒樣本中的病毒核酸進行定性檢測，旨在為獸醫實驗室提供一個標準化的操作流程以確保檢測結果的準確性和可比性。

在準備階段，標準首先明確了實驗所需的各種試劑和材料，包括但不限于引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶等，并強調了使用高質量水的重要性。此外，還描述了樣品采集的具體要求，如采樣部位、保存條件等，確保從源頭上保證檢測質量。

接著，對于實際操作過程，《GB/T 27621-2011》詳細列出了從RNA提取到逆轉錄合成cDNA再到最終PCR擴增的每一步驟。其中包括了推薦使用的儀器設備類型、溫度循環參數設置以及如何避免交叉污染的有效措施等內容。特別指出，在整個實驗過程中必須嚴格遵守無菌操作原則，防止外來因素干擾實驗結果。

最后，關于結果分析部分，本標準給出了陽性對照與陰性對照的選擇依據及作用說明，同時介紹了如何根據電泳圖譜判斷樣品是否含有目標病毒序列的方法。通過對比不同樣品間條帶的位置和強度差異，可以初步確定其感染狀態。此外，還提到了重復性測試的重要性，建議至少連續兩次獲得相同結果才能做出最終結論。

此標準為從事相關領域工作的研究人員和技術人員提供了科學指導，有助于提高我國動物疫病防控水平。


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  • 2011-12-30 頒布
  • 2012-04-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T27621—2011

馬鼻肺炎病毒PCR檢測方法

ProtocolofPCRforequinerhinopneumonitisvirus

2011-12-30發布2012-04-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T27621—2011

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業部提出

。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位新疆農業大學

:。

本標準主要起草人冉多良單文魯馬偉王傳鋒張偉

:、、、、。

Ⅰ

GB/T27621—2011

馬鼻肺炎病毒PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了馬鼻肺炎病毒的檢測方法

PCR。

本標準適用于馬匹的流通和進出境檢疫實施馬鼻肺炎的現場檢疫和后續監管工作一步法

。PCR

檢測技術適用于實驗室細胞毒樣品檢測巢式檢測技術適用于臨床疑似樣品及細胞毒樣品檢測

;PCR。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

馬傳染性鼻肺炎

EHV:equinerhinopneumonitis,。

核糖核酸

RNA:ribonucleicacid,。

細胞病變

CPE:cytopathiceffect,。

溴化乙錠

EB:ethidiumbromide,。

乙二胺四乙酸

EDTA:ethylenediaminetetraaceticacid,。

十二烷基磺酸鈉

SDS:sodiumdodecylsulfate,。

倉鼠幼腎細胞

BHK-21:babyhamsterkidneycell,。

磷酸鹽緩沖液

PBS:phosphatebuffersodium,。

4試劑和材料試劑不經注明均為分析純

(,)

41水符合中一級水的規格

.:GB/T6682。

42酶

.RNAA。

43酚三氯甲烷

.-。

44瓊脂糖凝膠見

.2%:A.1。

45溴化乙錠見

.(10μg/μL):A.2。

46聚合酶

.DNA(5U/μL)。

47電泳緩沖液見

.50×TAE(pH8.5):A.3。

482+

.10×PCRBuffer(plusMg)。

49

.2.5mmol/mLdNTP。

410蛋白酶

.K(20mg/mL)。

411細胞

.BHK

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