實(shí)驗(yàn)9 醬油中氨基酸的測定

實(shí)驗(yàn)九醬油中氨基酸總量的測定

—甲醛法（微型滴定）實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)步驟注意事項(xiàng)儀器試劑問題討論數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解醬油的用途及其制備。2.掌握醬油中氨基酸含量測定的原理和方法。3.學(xué)會(huì)微型滴定操作。4.掌握移液管和容量瓶的使用。實(shí)驗(yàn)原理氨基酸是一類兩性物質(zhì)，在溶液中以偶極離子的形式存在，不能用直接法滴定氨基酸上的羧基。

氨基與甲醛加成后，由于羥基為吸電子基團(tuán)，氮原子上電子云密度顯著降低，消弱了它接受質(zhì)子的能力，使氨基的堿性消失，則可用強(qiáng)堿如NaOH來滴定氨基酸的羧基，從而測定醬油中氨基酸的總量。儀器與試劑1.儀器微型滴定管（3mL）、容量瓶（100mL）、移

液管（5mL、10mL）、錐形瓶（25mL）、燒

杯、電子天平（0.01g）、抽濾裝置等。2.試劑醬油、HCHO（18%）、NaOH(約0.1mol·L-1)、

活性炭、酚酞指示劑（0.04%醇溶液）、濾紙等

實(shí)驗(yàn)步驟醬油脫色減壓過濾微型滴定定容100mL用移液管取10.00mL醬油，加入4g活性炭，加熱煮沸，脫色（攪拌）10min。減壓過濾墊2層濾紙，傾注法過濾，洗滌時(shí)每次用水5mL，洗2-3次。醬油脫色定容將濾液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，并洗滌抽濾瓶2-3次，定容至100mL。

固液分離技術(shù)——減壓過濾

容量瓶、比色管的使用——定容操作微型滴定從容量瓶中吸取5.000mL醬油稀釋溶液，加3d酚酞，用NaOH滴定多余的酸.再加入中性甲醛4mL（18%），放置1min后，用NaOH滴定，終點(diǎn)顏色為微紅色。主要操作1.移液操作

(1)移液管準(zhǔn)備：自來水清洗三次，蒸餾水潤洗3次，管壁外的水用濾紙擦干，管內(nèi)的水用洗耳球吹干。移取溶液時(shí)，再用待取液潤洗3次。

(2)取液：右手拿移液管，左手拿洗耳球，將溶液吸至刻度線以上，食指封口。

(3)放液：減輕食指壓力，緩慢將溶液放至刻度處，將移液管口與承接容器輕靠，移液管豎直，承接容器傾斜，將溶液緩慢放至承接容器中（半滴處理）。2.定容操作

檢漏—洗滌—無損轉(zhuǎn)移—直立混勻—定容(1)檢漏：容量瓶裝滿水，倒置、靜置1min。(2)洗滌：自來水洗三次，蒸餾水潤洗三次。(3)無損轉(zhuǎn)移：將溶液無損轉(zhuǎn)移至容量瓶中。(4)直立混勻：2/3刻度處，不蓋容量瓶蓋子搖勻。(5)定容：加入蒸餾水至刻度線，搖勻。3.微型滴定操作

微型滴定管的使用與酸堿滴定管相似(1)洗滌時(shí)類似移液管。

(2)插入塑料尖嘴以減少半滴誤差，

尖嘴可重復(fù)使用。

(3)讀數(shù)時(shí)3位小數(shù)。

項(xiàng)目IIIIII中和醬油中其它酸NaOH滴定的終體積Ve/mLNaOH滴定的初體積V0/mLNaOH中和酸體積V/mL氨基酸滴定NaOH滴定的終體積Ve/mLNaOH滴定的初體積V0/mLNaOH滴定氨基酸的體積V/mL氨態(tài)氮含量（g·100mL-1）平均值（g·100mL-1）偏差相對平均偏差數(shù)據(jù)處理注意事項(xiàng)1.抽濾瓶洗滌干凈，抽濾時(shí)墊2層濾紙。2.洗滌時(shí)少量多次，每次用水5mL。3.用小燒杯取NaOH溶液。4.甲醛禁止敞口放置，滴一份加一份。5.微型滴定管的讀數(shù)。6.移液管和容量瓶的使用。問題討論1.實(shí)驗(yàn)所用中性甲醛為什么呈微紅色？

答：甲醛中常含有微量甲酸，應(yīng)預(yù)先以酚酞為指示劑，用NaOH溶液中和至溶液呈微紅色。2.NaOH為非基準(zhǔn)試劑，采用什