胎盤(pán)球蛋白含量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)六胎盤(pán)球蛋白含量測(cè)定氮含量蛋白質(zhì)含量＝16％蛋白質(zhì)含量＝氮含量×6.25蛋白質(zhì)主要包括Ｃ、Ｈ、Ｏ、Ｎ、Ｓ氮元素是蛋白質(zhì)區(qū)別于糖和脂的特征性元素各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為16%非蛋白氮

nonproteinnitrogen(NPN)

非蛋白態(tài)的含氮化合物（氨基酸、尿素、尿酸、肌酐、胍類(lèi)、胺類(lèi)及吲哚）＝總氮含量－非蛋白氮含量（）×蛋白質(zhì)含量6.25原理

含氮化合物經(jīng)H2SO4消化后，化合物中碳氧化成CO2而除去，氮?jiǎng)t全部與H2SO4作用，生成(NH4)2SO4，加鈉氏試劑后，產(chǎn)生黃色化合物，可作定量測(cè)定。

由胎盤(pán)球蛋白的總氮量與非蛋白氮（NPN）含量的差，可算得蛋白質(zhì)氮量，通過(guò)蛋白質(zhì)含氮量，可換算蛋白質(zhì)含量。

樣品1、胎盤(pán)球蛋白稀釋液：

1毫升胎盤(pán)球蛋白注射液用生理鹽水稀釋至200毫升。

胎盤(pán)血來(lái)源的丙種球蛋白含蛋白質(zhì)５％2、非蛋白氮（NPN）濾液制備

鎢酸法：取胎盤(pán)球蛋白0.1毫升于事先加好3.5毫升蒸餾水之加入0.2毫升2/3NH2SO4，0.2毫升10%鎢酸鈉，稍加放置，用干濾紙過(guò)濾即得。鎢酸鈉與硫酸作用生成鎢酸，后者使蛋白質(zhì)沉淀，過(guò)濾可得無(wú)蛋白濾液Na2WO4＋H2SO4H2WO4＋Na2SO4

操作總氮管NPN管標(biāo)準(zhǔn)管空NPN濾液（ml）1.0胎盤(pán)球蛋白稀釋液（ml）

0.25亞硒酸消化液（ml）

0.1

0.1

消化至溶液有黑變澄清標(biāo)準(zhǔn)(NH4)2SO4

1.0蒸餾水

3.5

3.5

2.5

2.510%酒石酸鉀鈉（ml）

1.0

1.0

1.0

1.0鈉氏應(yīng)用液（ml）

2.0

2.0

2.0

2.0各管混勻后，于460nm處比色消化

氮量測(cè)定含氮化合物＋H2SO4(NH4)2SO4

消化的目的：使有機(jī)氮（氨基酸上的－NH2)轉(zhuǎn)化為NH4+。

亞硒酸消化液：H2SeO3

和H2SO4

作用：提高沸點(diǎn)；將有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為NH4+顯色劑鈉氏試劑：碘化汞、碘化鉀、NaOH

碘化汞＋碘化鉀碘化鉀汞復(fù)鹽

(NH4)2SO4＋2NaOH2NH4OH＋Na2SO4

NH4OH＋2(KI)2HgI2＋3NaOHHg4KI＋3NaI＋3H2O＋ONH2IHg

碘化雙汞銨黃棕色沉淀

總氮管NPN管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣品稀釋液NPN濾液標(biāo)準(zhǔn)硫酸氨蒸餾水計(jì)算NPN含量mg%＝總N含量mg%＝樣品OD標(biāo)準(zhǔn)OD×0.01×40×100樣品OD標(biāo)準(zhǔn)OD×0.01×800×100蛋白N%＝總N%－NPN%蛋白質(zhì)含量＝蛋白N×6.25注：蛋白質(zhì)含量應(yīng)不低于5%思考題實(shí)驗(yàn)中使用濃硫酸、鎢酸鈉、亞硒酸、酒石酸鉀鈉的目的分別是什么？答案濃硫酸：消化蛋白，吸收釋放出來(lái)的NH3，使之成為NH4+。鎢酸鈉：沉淀蛋白質(zhì)，除去蛋