DB42-T 1786.3-2023 生豬疫病防控技術 第3部分：非洲豬瘟監測樣品采集技術規程

ICS65.020.30CCSB41DB42湖北省市場監督管理局發布IDB42/T1786.3—2023前言 V 12規范性引用文件 13術語和定義 14樣品采集處理與檢測方法 1 1 樣品處理保存與運輸234.4 5豬場環境監測樣品采集 2 環境監測樣品采集方法25 豬舍內環境監測樣品采集35 豬舍外環境監測樣品采集355 6豬群監測樣品采集 47處理方案 48檔案記錄 4附錄A （資料性）車輛樣品采集部位示意圖6 （資料性）種豬群樣品采集數量計算公式7附錄C（規范性）群體數量較大時采樣數量表 8DB42/T1786.3—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件是DB42/T1786《生豬疫病防控技術》的第3部分。DB42/T1786已經發布了以下部分：——第1部分：偽狂犬病監測評估技術規程；——第2部分：傳染性胸膜肺炎監測評估技術規程；——第3部分：非洲豬瘟監測樣品采集技術規程。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由湖北省農業科學院提出。本文件由湖北省農業農村廳歸口。本文件起草單位：湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所，華中農業大學，湖北省動物疫病預防控制中心，紅安縣鴻彤牧業公司，湖北金旭農業發展股份有限公司，湖北奧登農牧科技有限公司。本文件主要起草人：楊克禮，田永祥，何啟蓋，裴潔，郭銳，周丹娜，李文濤，吳早林，張召，張華平，庫旭鋼，劉威，梁婉，劉澤文，袁芳艷，高婷。本文件為首次發布。本文件實施應用中的疑問，可咨詢湖北省農業農村廳，聯系電話郵箱：hbsnab@126.com；對本標準的有關修改意見或建議，請反饋至湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所，聯系電話郵箱：hbxms@163.com。DB42/T1786.3—2023V引言非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性動物傳染病，以高熱、網狀內皮系統出血和高死亡率為特征。世界動物衛生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病，是嚴重危害我國養豬業的烈性傳染病。由于目前尚無安全有效的疫苗，對于該病的防控主要以加強生物安全為主。制定非洲豬瘟監測樣品采集技術規程，有利于養殖場科學規范監測疫情，盡早采取防控措施，有效預防和控制該病的發生與流行，提升生豬疫病防控技術水平。DB42/T1786擬由以下部分構成，具體如下：——第1部分：偽狂犬病監測評估技術規程。目的在于對采用的檢測技術，監測群體的規模以及監測頻次提出相應的規范要求。——第2部分：傳染性胸膜肺炎監測評估技術規程。目的在于對豬傳染性胸膜肺炎的檢測、預防和治療提出相應的規范要求。——第3部分：非洲豬瘟監測樣品采集技術規程。目的在于對豬場環境非洲豬瘟監測樣品采集區域、采集點、采樣頻次和豬群非洲豬瘟監測樣品組織類型、采集數量、采集頻次提出相應的規范要求。本文件為系列文件，目的是針對豬偽狂犬病、豬傳染性胸膜肺炎和非洲豬瘟提出對應樣品采集、檢測、監測技術要求。之后涉及不同病原的檢測、監測、防控規定，歸為本文件的不同部分。DB42/T1786.3—20231生豬疫病防控技術第3部分:非洲豬瘟監測樣品采集技術規程本文件規定了非洲豬瘟監測樣品采集的術語與定義、樣品采集處理與檢測方法、豬場環境監測樣品采集、豬群監測樣品采集、處理方案和檔案記錄。本文件適用于豬場非洲豬瘟監測樣品的采集。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T18648非洲豬瘟診斷技術GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T25169畜禽糞便檢測技術GB/T27522畜禽養殖污水采樣技術規范NY/T541獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技術規范NY/T1948獸醫實驗室生物安全要求通則SN/T1559-2010非洲豬瘟檢疫技術規范3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1非洲豬瘟africanswinefever是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬和野豬的一種急性、熱性、高度接觸性動物傳染病，以高熱、網狀內皮系統出血和高死亡率為特征。[來源：SN/T1559-2010，3.1，有修改]3.2監測monitoring采用規定的方法，持續對特定群體中疫病的發生、流行、分布及相關因素進行觀察和檢測的過程。3.3監測樣品monitoringsample取自生豬或環境，擬通過檢測反映個體、群體或者環境有關狀況的材料或物料。4樣品采集處理與檢測方法4,1采樣前準備2DB42/T1786.3—20234.1.1人員準備采樣人員經洗手消毒，穿戴好一次性手套、防護服、口罩、鞋套，攜帶采樣所需物品。4.1.2物品準備棉拭子、裝有PBS的離心管、真空采血管、記號筆、剪刀、鑷子、75%酒精棉、密封袋、樣品箱、冰袋等,可根據實際需要增減采樣物品。4.2樣品的采集采集豬的扁桃體、口鼻拭子等樣品及豬場環境中的粉塵、糞便、尿液、水、土壤等樣品。口鼻拭子及組織樣品的采集應符合NY/T541中的規定；糞便樣品采集應符合GB/T25169中的規定；污水樣品采集應符合GB/T27522中的規定；土壤樣品用無菌鑷子取2-5g裝入無菌離心管中，做好標記。采集豬樣品時要求一豬一副手套，6小時內完成全部樣品采集。4.3樣品處理、保存與運輸樣品處理、保存及運輸，應符合NY/T541中的規定。4,4檢測方法按GB/T18648中的非洲豬瘟病毒實時熒光PCR檢測方法檢測非洲豬瘟病毒核酸。5豬場環境監測樣品采集5.1采樣位置選擇原則工作中高頻率接觸點、不易清洗點等高風險點。5.2環境監測樣品采集方法戴一次性PE手套，將用生理鹽水充分浸濕的無菌棉拭子在物體表面涂抹3-5次后，放入裝有1-2ml滅菌PBS的離心管中。做好標記后冷藏或冷凍狀態下保存或送檢。5.3辦公及生活區樣品采集辦公及生活區各場所樣品采集按表1規定執行。表1辦公及生活區樣品采集份數及采樣頻率每個采樣點采品，每個采樣區域的樣品混DB42/T1786.3—20233表1辦公及生活區樣品采集份數及采樣頻率（續）個樣品，每個采樣區域的樣樣本進行檢5.4豬舍內環境監測樣品采集豬舍內環境樣品采集按表2規定執行。表2豬舍內環境樣品采集點、樣品采集份數及采樣頻率每個采樣點域5.5豬舍外環境監測樣品采集豬舍外環境樣品采集按表3規定執行。表3豬舍外環境樣品采集點、樣品采集份數及采樣頻率每個采樣點采集1-2份樣5.6人員監測樣品采集DB42/T1786.3—20234各類人員樣品采集按表4規定執行。表4各類人員樣品采集份數及采樣頻率用生理鹽水浸濕的無菌棉拭子采集5.7車輛監測樣品采集車輛每次進場前用生理鹽水浸濕的棉拭子擦拭車門把手、輪胎、前擋泥板、引擎蓋板、底盤、后備箱、方向盤、座椅、內部門把手、腳踏板、車廂（前、中、后處的邊角、圍欄、縫隙）。每輛車采集的樣品份數不少于20份，車內部所有樣品混合成1份樣本，車前部所有樣品混合成1份樣本，車后部所有樣品混合成1份樣本。車輛樣品采集部位見附錄A。6豬群監測樣品采集豬群監測樣品采集時不同豬群的抽樣比例及采樣頻率按表5規定執行。表5不同豬群抽樣比例及采樣頻率件下，不同預期流行率、不同可接受誤差的采樣數量參7處理方案按照本文件采樣方案檢測樣品中如非洲豬瘟病毒核酸出現陽性，則按照國家現行非洲豬瘟疫情處置方案處理。采樣中應做好場地、物品、操作人員防護用品等消毒或無害化處理。廢棄物處置應符合GB19489和NY/T1948中的規定。陽性樣品及檢測余樣均按GB19489要求做無害化處理。8檔案記錄DB42/T1786.3—20235樣品采集過程中，隨時做好標記和檔案記錄。檔案記錄應包括樣品采集時間、地點，樣品類型，樣品數量，樣品編號，樣品采集人，樣品檢測方法，樣品檢測結果，樣品檢測人，余樣處理方法，余樣處理人，審核人等內容。DB42/T1786.3—20236車輛樣品采集部位示意圖小型車監測樣品采集部位參見圖1。圖A.1小型車監測樣品采集部位示意圖貨車等大型車監測樣品采集部位參見圖2。圖A.2大型車監測樣品采集部位示意圖DB42/T1786.3—20237種豬群樣品采集數量計算公式群內個體數量大，對抽樣數量的影響可忽略不計時，采樣數量的公式如下：P——預期流行率；z——來自標準正態分布1-α/2百分位點。對于每一個置信水平，都有一個相應的z值。生物學研究中，常用的置信水平為90%、95%、99%，其對應的z值分別是1.64、1.96、2.58，也可以選擇其他不同的置信水平，其對應的z值可通過查表獲得