《動物藥學》-靈芝多糖發酵生產典型工作任務

靈芝多糖發酵生產一、任務基本信息項目核心內容任務名稱靈芝多糖發酵生產合作雙方校方：江蘇農牧科技職業學院生物醫藥學院企業：江蘇百草堂藥業有限公司適用專業/崗位專業：生物制藥技術崗位：發酵工程制藥工參與人員校方：圣志存、洪偉鳴、王米雪企業：李然、程世清、金沖任務目標一、知識目標1.掌握靈芝多糖液態深層發酵的基本原理與生產工藝特點。2.掌握培養基配制、滅菌原理及無菌操作的理論依據。3.理解液態深層發酵工藝參數（溫度、pH、溶氧、攪拌轉速、接種量、培養時間）對靈芝菌絲生長及多糖合成的影響機制。4.掌握靈芝發酵過程生長曲線變化規律，熟悉菌絲生長、代謝產物積累的動態變化特點及發酵異常現象的成因。5.掌握靈芝多糖提取、分離、純化的基本原理，理解水提、醇沉、離心、過濾等純化技術的理論基礎。6.了解生物發酵車間GMP規范、發酵設備安全操作規程、實訓過程質量控制與安全生產知識。二、技能目標1.熟練掌握無菌接種、超凈臺操作、菌種傳代與保藏技能，杜絕雜菌污染。2.能夠根據配方精準稱量原料，獨立完成發酵培養基配制、pH調節、分裝與高壓蒸汽滅菌操作，規范完成前期準備工作。3.能夠熟練操作搖床、發酵罐等設備，完成靈芝液態深層發酵接種、培養全過程，能夠根據生長狀態調整培養參數。4.能夠定時觀察發酵狀態，取樣檢測菌絲長勢、發酵液性狀，準確記錄發酵數據，判斷發酵終點、識別發酵污染、長勢差等常見異常問題。5.熟練掌握發酵液預處理、離心、過濾、熱水浸提、乙醇沉淀等操作，獨立完成靈芝多糖粗品提取與純化操作。6.能夠按照6S與GMP要求完成設備清洗、場地整理、器具滅菌，具備發酵生產過程質量控制、安全操作和實訓問題分析與處理能力三、素質目標1.

培養嚴謹細致的科學態度，嚴格遵循操作規范，重視發酵過程中的數據真實性與可追溯性，杜絕違規操作。2.

強化責任與安全意識，樹立“質量第一”的理念，能識別發酵生產中的安全隱患（如滅菌不徹底、設備泄漏）并及時處理。3.

提升團隊協作與問題解決能力，在多崗位配合中高效溝通，面對發酵異常時能冷靜分析、協同制定解決方案，適應工業化生產需求。二、任務方案【任務說明】《靈芝多糖發酵生產》緊扣大健康產業新趨勢，聚焦中醫藥現代化核心新賽道—中藥發酵，立足新賽道技能型人才稀缺，以產教融合理念為指引，引入合作企業靈芝發酵真實項目，構建“生產場景+教學實踐”一體化教學模式，精準對接生物制藥技術、中藥制藥專業人才培養目標，實現生產與教學深度融合、協同育人。【儀器與設備】5L全自動小型發酵罐、30L機械攪拌式發酵罐【任務流程】序號操作步驟具體操作內容1菌種活化1.取保存于液體石蠟靈芝菌株，接種至斜面培養基（馬鈴薯葡萄糖培養基）；2.

30℃恒溫培養3-5天，直至斜面長滿綠色菌絲·接種過程需在無菌超凈臺操作，避免雜菌污染；·

活化后的菌種需鏡檢確認無雜菌，菌絲形態正常

。2搖瓶培養1.

配制搖瓶培養基（玉米漿20g/L、葡萄糖20g/L、乳糖10g/L、KH?PO?

1g/L），分裝后121℃滅菌20min；2.

接入活化菌種，28℃、220r/min搖床培養2-3天；3.

培養基pH需調節至6.5-6.8；4.

培養結束后檢測菌種濃度（OD600≥2.0），無雜菌生長。

3種子罐擴大培養

1.

1-3級種子罐依次擴大，培養基同搖瓶（按比例放大），121℃滅菌30min；2.

按10%-15%接種量轉接，27℃培養，通氣量1:0.8-1.0

vvm，攪拌速度200-300r/min；3.

培養24-36h后，鏡檢菌絲體形態（分支均勻），接入發酵罐

1.

每級種子罐接種前需確認無菌狀態；4.

控制溶氧≥30%，避免缺氧抑制菌種生長

。4發酵培養基配制與滅菌1.

培養基配制與滅菌·配方：玉米漿30g/L、葡萄糖15g/L、乳糖25g/L、硫酸銨5g/L、CaCO?

3g/L、MgSO?

0.5g/L；·操作：將原料溶解后調節pH至6.5，轉入發酵罐，關閉罐門后121℃、0.1MPa濕熱滅菌30min，滅菌后降溫至27℃。5發酵培養1.接種：種子液按10%-15%比例接入發酵罐，接種過程需無菌操作，避免罐內壓力驟變；2.發酵參數控制：·溫度：前3天25-27℃，后期降至23-25℃（延長產素期）；

·

pH：維持6.2-6.8，通過自動補加25%氨水調節；·溶氧：通氣量1:1.0-1.2

vvm，攪拌速度300-400r/min，確保溶氧≥20%；·營養補加：發酵48h后，按速率補加葡萄糖（5g/L·d）、硫酸銨（1g/L·d），避免碳源/氮源過量抑制產素。3.

過程監測·取樣頻率：每4h取樣1次；·檢測項目：菌種濃度（OD600）、青霉素含量（高效液相色譜法）、pH、殘糖量、雜菌情況；·發酵終點：殘糖量≤1g/L時，終止發酵，發酵周期約6-8天。【數據記錄與報告】序號考核項目內容操作記錄工況確認1移種操作升罐壓，確定種子罐罐壓大于發酵罐罐壓。罐壓：2種子罐準備工作空氣流量調節對過濾器進行通氣操作，確認過濾系統完好。3過濾器蒸汽滅菌高效過濾器蒸汽滅菌，規定溫度維持規定時間。溫度：開始時間：結束時間：4滅菌后對過濾器進行吹干。開始時間：結束時間：5種子罐實消消毒滅菌消毒控制規定溫度、壓力維持規定時間。溫度：壓力：開始時間：結束時間：6接種操作接種操作接種時，操作控制罐壓，罐壓為：7發酵罐空罐準備流量調節對過濾器進行通氣操作，確認過濾系統完好。過濾器蒸汽滅菌高效過濾器蒸汽滅菌，規定溫度維持規定時間。開始時間:結束時間:完成滅菌后對過濾器進行吹干

開始時間:結束時間:空罐準備使用一次水對罐體進行全面清理

開始時間:結束時間:8發酵罐實消消毒滅菌消毒控制規定溫度、壓力維持規定時間。溫度：壓力：開始時間：結束時間：【考核評價】項目操作要求考核內容評分標準分值評分結果（一）交接班及設備檢查(2.5分)種子罐交接檢查（關鍵控制點）PI1301檢查檢查牌未旋轉到“檢查”狀態，只要有一項漏檢，扣0.8分0.8PI1304檢查PI1307檢查FI1301檢查發酵罐A/B交接檢查（關鍵控制點）PI1308檢查檢查牌未旋轉到“檢查”狀態，只要有一項漏檢，扣0.8分0.8PI1311檢查PI1314檢查FI1302檢查物品檢查檢查工具及物品未檢查接種工具、儀器設備等物品，扣0.2分0.2過程巡檢種子罐檢查種子罐未檢查，檢查后未將罐體、管線、閥件旋轉到“檢查”狀態，扣0.2分0.2發酵罐漏點檢查發酵罐漏點檢查發酵罐A未檢查，檢查后未將罐體、管線、閥件旋轉到“檢查”狀態，扣0.5分0.5(二)接種操作(8.5分)接種帽滅菌旋轉接種帽種子罐實消過程中第一次未旋轉接種帽(有動作，接種帽擰動即可），扣0.2分0.2種子罐實消過程中第二次未旋轉接種帽，或未戴隔熱手套，扣1分1取樣正確標注未按照規范填寫罐號/培養時間/取樣時間的標簽，扣0.4分0.4取樣操作未按照規范用新潔爾滅進行消毒操作，扣0.5分0.5定量取樣取樣量不在（100mL±5mL）范圍內，扣1分1接種環境滅菌接種前未正確使用新潔爾滅對周圍環境滅菌（需按照接種口為中心0.5米范圍內旋轉噴灑操作)，扣0.2分0.2接種工未戴手套操作，扣0.5分0.5接種操作消毒工未按照要求進行接種操作（先在火圈內鋪好棉花，再用95%酒精浸潤脫脂棉），扣0.3分0.3消毒工未正確、及時佩戴隔熱手套或未擰下接種帽，接種帽至于火焰附近5-10厘米處，扣0.5分0.5接種工未按順序點火，在火焰附近5厘米范圍內松繩、去掉牛皮紙、瓶塞，扣0.5分0.5未將用過的火柴、棉繩、牛皮紙置于防爆垃圾桶中，扣0.5分0.5接種工未在火焰周圍2-5厘米內需要旋轉、穩定快速拔出瓶塞，扣0.5分0.5接種工未在火焰保護下，準確，迅速的倒入種子，或接種瓶脫手，扣0.5分0.5未在火焰熄滅前完成接種操作，扣0.5分0.5接種從打開接種帽到開始擰接種帽，時間在1分鐘內，超過1分鐘，扣0.5分0.5接種完成后，消毒工未戴手套拿接種帽（帽口向火焰）在火焰上旋轉一圈（約5秒），扣0.3分0.3消毒工未戴手套在5秒內擰上接種帽，扣0.3分0.3接種后處理接種后處理消毒工接種完成后未正確熄滅火焰，扣0.3分0.3(三)接種質量(3分)接種質量裁判現場評分實際接種量/100g=K。K＜0.97，得0分；0.97≤K≤0.98，得1分；K＞0.98，得2分；K≧0.99，得3分3(五)填寫生產記錄(2分)生產記錄情況按照流程記錄工段操作內，未按照流程記錄正確的時間點，扣1分1記錄內容正確生產記錄內容不正確或有空項，扣0.5分0.5記錄工整記錄涂改，或記錄不工整，扣0.5分0.5（六）安全文明生產（5分）個體防護按照行業有關安全規范，著工作服、手套未佩戴或佩戴不規范（頭發露出工作帽、未系鞋帶、工作服未系滿扣、帶飾品），扣1分1操作時未戴手套或操作過程中手套放置在操作區域，扣1分1安全行為選手在操作過程中要規范動作及行為腳踩管道、蹲坐、跑步或蹦跳上樓梯，上下樓梯每次跨一節樓梯，或出現摔倒現象，扣1分1環境衛生保持現場環境整齊、清潔、有序未按照HSE規范放置廢物，或從柜中(或推車上）取放物品用后沒有歸位，扣1分1工具使用操作任何工具及物品是否規范操作工具及物品脫落掉地，或未放在指定位置，或身體各部位接觸管道，扣1分1重大事故由于操作不當引起設備損壞及人身傷害事故考核期間出現由于操作不當引起的設備損壞，或人身傷害事故，扣5分（本項未倒扣分）★三、任務評分本任務考核采用校企雙導師聯合評分機制，雙方依據不同考核重點分工評分，具體如下：企業導師：聚焦學生實操能力，重點評估實驗過程中的操作規范性、數據準確性及問題解決能力，評分占比60%。校內導師：聚