項目八 紫外－ 可見分光光度法 課件-《分析化學》同步教學（北京出版社）

項目八紫外－可見分光光度法任務一基礎理論基本知識學習目標1357246了解紫外－可見分光光度法的特點理解紫外－可見分光光度法測量條件的選擇掌握光的吸收定律及有關計算了解偏離光的吸收定律的原因了解紫外－可見分光光度計的基本部件掌握紫外－可見分光光度法的定量分析方法掌握紫外－可見分光光度法的定義８.１概述８.１.１紫外－可見分光光度法的基本概念１.紫外－可見分光光度法紫外－可見分光光度法是利用分光光度計依據溶液中的吸光物質對紫外光區(２００~４００nm)和可見光區(４００~７６０nm)輻射能的吸收來研究物質的組成和含量的分析方法，也稱為紫外－可見吸收光譜法。紫外光是波長為１０~４００nm的電磁輻射，其中波長在１０~２００nm的為遠紫外光，波長在２００~４００nm的為近紫外光，可見光是指波長在４００~７６０nm的電磁輻射。８.１概述２.吸收光譜吸收光譜又稱為吸收曲線，是以波長λ為橫坐標，以吸光度Ａ為縱坐標所描繪的曲線，如圖８-１所示，吸收光譜的特征常用一些術語來描述。(１)吸收峰:曲線上吸光度最大的地方，它所對應的波長稱為最大吸收波長，用符號λmax表示。(２)峰谷:峰與峰之間吸光度最小的部位，此處的波長稱為最小吸收波長，用符號λmin表示。(３)肩峰:在一個吸收峰旁邊產生的一個曲折。(４)末端吸收:只在圖譜短波一端呈現強吸收而不成峰形的部分。８.１概述準確度高:在定量分析方面，相對誤差一般為１％~５％，性能較好的儀器其測量的相對誤差為０.５％B儀器設備:設備簡單，價格相對比較低廉，易于普及。D選擇性好:被測物質不同，對波長的電磁輻射的吸收也不相同。C靈敏度高:被測物質的濃度下限一般可達10-7~10-4g/ml非常適用于微量或痕量組分的分析A應用范圍廣泛:很多無機離子或有機化合物。都可以直接或間接地用紫外－可見分光光度法進行定性或定量分析。E８.１概述８.１.２電磁輻射和電磁波譜１.電磁輻射電磁輻射也稱為電磁波，是一種能夠在空間高速傳播的粒子流，具有波動性和粒子性，即波粒二象性。光是電磁波的一種，光的波動性常用光速、波長和頻率加以描述。光速、波長和頻率的關系為:ν為頻率，Ｃ為光在真空中的傳播速度，且Ｃ＝２.９９７×１０８

m/s，λ為波長。８.１概述光的粒子性是把光作為具有一定能量的光子(或光量子)加以描述，光的粒子性體現在熱輻射、光的吸收和發射，光電效應以及光的化學作用等方面。光子的能量與波長成反比，與頻率成正比，它們的關系為式中ｈ為普朗克常數，h=

６.６２６２×１０－３４J·ｓ，E為光子的能量，單位為焦耳(Ｊ)或電子伏特(ｅｖ)(１ｅｖ＝１.６０２２×１０－１９J)。說明，在計算式中波長λ的單位要轉換成米(ｍ)，１nm＝１０－９ｍ。所有電磁波在本質上是完全相同的，不同電磁波之間的區別僅在于波長或頻率不同，其能量也不同。８.１概述２.電磁波譜把電磁波按照波長或頻率的大小順序排列起來，就稱為電磁波譜，電磁波譜的排布情況、頻率、波長及實際用途如表８-１所示。８.１概述３.

可見光在電磁波譜中，人眼能感覺到的光稱為可見光，其波長為４００~７６０nm，它們只是電磁波譜中一個很小的波段，如日光、白熾燈光及各種顏色的光等。具有單一波長的光稱為單色光。由不同波長的光混合而成的光稱為復合光，如日光、白熾燈光等，都是復合光，白光(日光、白熾燈光、日光燈的光等)是各種色光按一定的強度比例混合而成的復合光。如果讓一束復合光通過棱鏡或光柵，就能散射出紅、橙、黃、綠、青、藍、紫等各種顏色的光，這種從復合光分離出單色光的現象稱為光的色散。８.１概述４.

互補色光將兩種適當顏色的單色光按一定強度比例混合后得到白光，則這兩種單色光互稱為互補色光，簡稱補色光，如圖８-２所示。在圖８-２中，通過原點的直線對應兩端的兩種色光互為補色光。例如，紫光與綠光互補，藍光和黃光互補。實驗證明，日光是由很多對補色光按一定強度比例混合而成的。８.１概述８.１.３物質的顏色與物質對光的吸收之間的關系如果把具有各種顏色的物體放置在黑暗處，則什么顏色也看不到。可見，物質呈現的顏色與光線有著密切的關系。物質的顏色就是光源發射的光線照射到該物質上，該物質吸收了某種波長的光線后又反射或透過另一種波長的光線到眼睛里，引起視覺有色感的結果。一種物質能呈現何種顏色，與光的波長和物質本身的結構有關。１.固體物質顏色與其對光的吸收的關系當白光照射到固體物質上時，由于固體物質的透光程度不同，對各種光線的吸收、透過、反射的程度也不同，從而呈現出不同的顏色。固體物質顏色與其對光的吸收的關系如表８-３所示。８.１概述８.１概述２.溶液的顏色與光的吸收之間的關系當白光照射到溶液中時，溶液中的溶質分子或離子選擇性地吸收了白光中的某一色光，并將這一色光的補色光透過溶液，因此，我們看到溶液的顏色是與溶液吸收光成互補色光的顏色。不同溶液對光的選擇性吸收不同，從而呈現不同的顏色。例如，高錳酸鉀溶液能夠吸收白光中的綠色光而呈現紫色。再如，硫酸銅溶液能夠吸收白光中的黃色光而呈現藍色。８.２光的吸收定律８.２.１透光率與吸光度１.透光率當一束平行的單色光照射到均勻、無散射的溶液時，一部分光被溶液吸收，一部分光透過溶液，還有一部分光被器皿表面反射。溶液對光的吸收如圖８３所示。８.２光的吸收定律入射光的強度

IO。透過光的強度It，吸收光的強度Ia，反射光的強度Ir，則在分光光度分析中，通常將被測溶液與參比溶液或標準溶液置于相同材質與型號的器皿中。因此，反射光的強度基本相同且很小，可以忽略，則上式可以簡化為:８.２光的吸收定律透過光的強度It與入射光的強度Io的比值稱為透光率或透光度，用符號Ｔ表示，則:溶液的透光率越大，表示它對光的吸收程度越小。溶液的透光率越小，表示它對光的吸收程度越大。２.吸光度溶液對光的吸收程度稱為吸光度，用符號Ａ表示。在實際應用時，吸光度Ａ等于透光率Ｔ的負對數。即:８.２光的吸收定律１.光的吸收定律光的吸收定律又稱為朗伯－比爾定律，光的吸收定律的物理意義可以表述為當一束平行的單色光通過均勻、無散射的含有吸光性物質的溶液時，在入射光的波長、強度及溶液的溫度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度Ａ與溶液的濃度ｃ及液層厚度Ｌ的乘積成正比。光的吸收定律的數學表達式為:式中Ｋ為吸光系數，是吸光物質在濃度為１及液層厚度為１ｃｍ時的吸光度。在給定單色光、溶劑和溫度等條件下，吸光系數Ｋ是物質的特征常數，表明物質對某一波長的吸收能力。８.２光的吸收定律光的吸收定律表明了物質對光的吸收程度與其濃度及液層厚度之間的數量關系，它不僅適用于均勻、無散射的溶液，而且也適用于均勻、無散射的固體和氣體；不僅適用于可見光區，也適用于紅外光區和紫外光區。光的吸收定律是分光光度法進行定量分析的基本定律。光的吸收定律僅適用于一定濃度范圍的稀溶液。２.

吸光系數溶液濃度的單位不同，吸光系數的物理意義和表達方式也不同。吸光系數常用以下幾種表達方式。(１)摩爾吸光系數:當入射光波長一定時，溶液濃度為１mol/L，液層厚度為１cm時的吸光度，用符號ε表示，單位為L/(mol·cm)(L·mol-1·cm-1)。通常將ε≥10４時稱為強吸收，ε<102時稱為弱吸收，ε介于兩者之間時稱為中強吸收。８.２光的吸收定律８.２光的吸收定律８.３紫外－可見分光光度計８.３.１主要部件分光光度計是指研究吸收或發射的電磁輻射強度和波長關系的儀器，分光光度計的波長范圍不同，可以分為不同的分光光度法，但其主要部件和工作原理基本相似。波長為２００~７６０nm，能夠任意選擇不同波長的單色光用來測定溶液的吸光度(或透光率)的儀器，稱為紫外－可見分光光度計。這類儀器的主要部件如圖８-４所示。８.３紫外－可見分光光度計８.３.２紫外－可見分光光度計的類型紫外－可見分光光度計型號很多，改進也快，尤其近年來很多儀器裝配了計算機和光多道二極管陣列檢測器，使儀器的質量、功能和自動化程度都得到了很大提高。不同類型的分光光度計之間的主要區別是光學系統不同。１.可見分光光度計可見分光光度計的光源一般是鎢燈，電磁輻射的波長范圍為３６０~８００nm，單色器為光柵，每臺儀器配有厚度不等的一套石英材料制成的吸收池，檢測器為真空光電管，顯示器為數字顯示，較早的也有指針顯示。這種儀器的構造簡單，單色性較差，常用于可見光區的一般定量分析。在實際工作中，較早使用的有７２１型分光光度計，現常用的是國產７２２型可見分光光度計。８.３紫外－可見分光光度計２.單光束分光光度計這類分光光度計用鎢燈或氫燈作光源,從光源到檢測器只有一束單色光。儀器的結構簡單,對光源發光強度的穩定性要求較高,常用的有國產７５３０型、ＵＶ７５５Ｂ型、ＴＵ－１８１０型和日產島津ＱＲ－５０型等。３.雙光束分光光度計這類分光光度計的特點是從單色器發射一束單色光,經過一個旋轉的扇面鏡將它分成波長相同的兩束交替的單色光,分別通過樣品池和參比池后,再用一個同步旋轉的扇面鏡將兩束透過光交替照射到光電倍增管上,使光電管產生一個交變脈沖信號,經過比較放大后,由顯示器顯示出透光率、吸光度、濃度或進行波長掃描,記錄吸收光譜,這類儀器的特點是測量中不需要移動吸收池,可在隨意改變波長的同時記錄所測量的光度值,便于描繪吸收光譜。８.３紫外－可見分光光度計４.雙波長分光光度計這類分光光度計的特點是儀器采用兩個并列的單色器，分別產生不同波長的兩束色光，交替照射同一試樣溶液，得到同一試樣溶液對不同波長單色光的吸收度差值。其優點一是不需要參比溶液；二是可以用雙波長的方式工作，也可以用單波長雙光束的方式工作。如國產ＷＦＺ８００￣Ｓ型、日產島津ＵＶ￣３００型等。８.３紫外－可見分光光度計８.３.３紫外－可見分光光度計的光學性能不同型號的紫外－可見分光光度計的價格差異較大，主要是由其光學性能決定的，一般從以下幾個方面進行比較和考察，根據不同的測量要求選擇相應的儀器。吸光度范圍波長重復性測光準確度光度重復性測光方式波長范圍狹縫或光譜寬雜散光波長準確度分辨率８.４定量分析方法利用紫外－可見分光光度法既可對物質進行定性分析，又可進行定量分析，這里主要討論定量分析。紫外－可見分光光度法不僅可以對在紫外－可見光區有吸收的無機物和有機化合物進行定量分析，而且還能夠對在紫外－可見光區沒有吸收的物質，通過與某些試劑發生“顯色反應”生成有強烈吸收的產物，實現對“非吸收物質”的定量測定。紫外－可見分光光度法進行定量分析的理論依據是光的吸收定律A=k·c·L，在一定條件下，被測溶液的吸光度與其濃度呈正比，因此，可以選擇適當的工作波長進行定量分析。利用分光光度法進行定量分析的分析方法較多，下面介紹幾種常用的方法。８.４定量分析方法標準曲線法又稱為工作曲線法，是分光光度法中最經典和較簡便易行的定量方法，特別適合于大批量樣品的定量測定。在測量時，要求用同一臺儀器，在固定工作狀態和測量條件下，當液層厚度一定時，溶液的吸光度與其濃度呈正比，即A=k′·c。１.配制標準溶液按照滴定分析中直接法配制標準溶液相同的要求配制分光光度法中所需的標準溶液。２.配制標準系列取若干個相同規格的容量瓶或比色管，按照體積由少到多的順序依次加入標準溶液，在相同的條件下加適量溶劑稀釋，并分別加入等體積的試劑及顯色劑，再加溶劑稀釋至相同的體積，搖勻備用。８.４定量分析方法３.

配制樣品溶液另取一個相同規格的容量瓶或比色管，精密吸取一定體積的原樣品溶液，按照與標準系列相同的操作程序和實驗條件，配制一定濃度的樣品溶液。若要測定大批量試樣，則按照同樣要求配制大批試樣溶液。４.

測定標準系列和樣品溶液的吸光度選擇合適的參比(空白)溶液，在相同的條件下，以該溶液最大吸收波長λmax的光作為入射光，分別測定標準系列各溶液和樣品溶液所對應的吸光度。５.

繪制標準曲線根據測定結果，以標準系列溶液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制吸光度－濃度曲線(Ａ－ｃ曲線)，稱為標準曲線，也稱為工作曲線或Ａ－ｃ曲線。８.４定量分析方法６.計算原樣品溶液的濃度根據測定樣品溶液的吸光度，在標準曲線的縱坐標上找到A樣，再在標準曲線的橫坐標上確定所對應的樣品溶液的濃度C樣，如圖８－７所示。最后，根據配制樣品溶液時所取的原樣品溶液的體積以及稀釋后的體積，用下式計算原樣品溶液的濃度C原樣。

C原樣＝C樣×稀釋倍數這種方法很適用于常規的分析工作，但儀器經搬動或維修后應重新校正波長。更換儀器時，必須重新繪制標準曲線。８.４定量分析方法８.４定量分析方法８.４.３吸光系數法吸光系數法又稱為絕對法，是直接利用朗伯－比爾定律的數學表達式A=k·c·L

進行計算的定量分析方法。在沒有標準品的情況下，可以從手冊或文獻中查得標準物質在λmax的吸光系數，然后采用與標準物質相同的溶劑，配制樣品溶液，在同樣條件下，測量樣品溶液的吸光度Ａ，則其濃度為:８.４定量分析方法有時也可以將待測試樣的吸光度換算成試樣組分的吸光系數，計算與標準品的吸光系數的比值，求出試樣中待測組分的質量分數:８.５偏離光的吸收定律的因素與測量條件的選擇根據光的吸收定律，當波長和入射光強度一定時，吸光度Ａ與吸光物質的濃度ｃ成正比，測量一系列不同濃度的標準溶液的吸光度，吸光度Ａ與吸光物質的濃度ｃ之間的關系，應該是一條通過原點的直線，但在實際工作中，有很多因素可能導致出現偏離直線的情況，即偏離光的吸收定律，給測定結果帶來誤差，如圖８-８所示。８.５偏離光的吸收定律的因素與測量條件的選擇８.５.１偏離光的吸收定律的因素偏離光的吸收定律的因素主要有化學因素、光學因素和儀器因素。１.化學因素化學因素有兩個，一是吸光物質不穩定，二是溶液濃度太大。吸光物質不穩定是指溶液中溶質因濃度改變而發生離解、締合、與溶劑間的作用形成新化合物或互變異構等因素，而發生偏離光的吸收定律的現象。２.光學因素(１)非單色光:光的吸收定律只適用于單色光，但實際上，由分光光度計的單色器所獲得的入射光并非純粹的單色光，而是具有較窄波長范圍的“復合光”。因為同一物質對不同波長光的吸收程度不同，所以非單色光導致偏離光的吸收定律。８.５偏離光的吸收定律的因素與測量條件的選擇(２)非平行光:光的吸收定律要求通過吸收池的入射光為平行光，但在實際測定中，通過吸收池的入射光，并非真正的平行光，而是稍有傾斜的光束，稍有傾斜的光束通過吸收池時，增加了吸收池的厚度，導致偏離光的吸收定律。(３)反射光:吸收池是光學玻璃或石英材質制成的。吸收池材質與吸收池中的溶液的折射率不同，入射光在吸收池內外界面通過時，有一部分光被反射而損失，使吸光度的測定值偏大，導致偏離光的吸收定律。(４)散射光:入射光通過溶液時，溶液中的粒子對其有散射作用，有一部分光會因散射而損失，導致偏離光的吸收定律。３.儀器因素儀器光源不穩定，吸收池的厚度不完全相同及池壁厚薄不均勻，光電管的靈敏性差，實驗條件的偶然變動等都會導致偏離光的吸收定律而產生誤差。８.５偏離光的吸收定律的因素與測量條件的選擇８.５.２顯色反應由于許多無機物和有機物的吸光系數小，測定的靈敏度低，往往不能用分光光度法直接測定，通常需要加入適當的試劑，將被測組分定量地轉變成吸光能力強的有色化合物后，再進行測定。能與被測組分定量發生化學反應、生成在紫外－可見光區有較強吸收的物質的化學試劑，稱為顯色劑。顯色劑與被測組分發生的化學反應稱為顯色反應。顯色反應有各種類型，如配位反應，氧化還原反應和縮合反應等，常用的有配位反應和氧化還原反應，尤以配位反應應用最為廣泛。顯色反應能否滿足分光光度法的測量要求，除選擇合適的顯色反應外，還必須控制顯色反應的條件。８.５偏離光的吸收定律的因素與測量條件的選擇８.５.３測量條件的選擇用分光光度法進行定量測量，測量條件的選擇需要從靈敏度、準確度和選擇性等幾個方面綜合考慮。一般來說，分析結果的準確度越高越好，但靈敏度和選擇性是準確度高的保證。如測量超微量組分時，先要考慮靈敏度，可以適當降低準確度。當使用高精密儀器進行測量時，準確度和靈敏度都較高，但存在干擾吸收，則要首先考慮選擇性，可以適當降低靈敏度。因此，只有綜合考慮，選擇適當的測量條件，才能獲得滿意的測量結果。８.６紫外－可見分光光度法的應用分光光度法最初僅用于對無機物進行定性和定量分析。隨著科學技術的不斷發展，分光光度法的測量儀器和測量方法得到極大的提高與發展，應用范圍幾乎涉及科學技術和科學研究的各個領域，是醫藥衛生、臨床檢驗、生物化學、石油化工、環境保護、質量控制等部門最常用的分析方法之一。例如，在環境監測中用雙硫腙分光光度法測定水中重金屬離子的含量；各類藥物幾乎都可以用分光光度法進行定性和定量測定；各種生化檢驗都要用到分光光度法等。８.６.１雙硫腙分光光度法雙硫腙分光光度法是以雙硫腙為螯合劑，使之與金屬離子反應生成帶色物質,而后用分光光度法測定該金屬離子的方法.這是環境監測中常用的一種間接的萃取分光光度法。８.６紫外－可見分光光度法的應用８.６.２紫外－可見分光光度法測定藥物的含量?中國藥典?中很多藥物的定性和定量測量都是使用紫外－可見分光光度法進行測定的。因此，可以按照?中國藥典?的測量標準，對各種相應的藥品進行檢測。下面僅介紹幾種藥物的測量方法。A丙磺舒藥物含量的測定B醋酸潑尼松龍片藥物含量的測定C乙酰氨基酚藥物的含量測定８.６紫外－可見分光光度法的應用８.６.３紫外－可見分光光度法在臨床化學中的應用臨床化學是通過檢測人體血液、尿液、腦脊液等標本中化學物質量與質的變化，為臨床醫生提供疾病診斷、病情監測、療效觀察、判斷愈后以及健康評估等信息，最終判斷被檢者是否存在疾病或排除某些疾病、揭示疾病變化，以及藥物治療對機體生物化學過程的影響，而檢驗分析技術目前應用最廣泛的是比色法。下面僅舉幾例加以說明。雙縮脲法測定血清總蛋白的含量01血糖含量的測定02血清甘油三酯含量的測定03血清總鈣含量的測定04任務二自我檢測一、名詞解釋１.紫外－可見分光光度法２.光的吸收定律３.透光率和吸光度４.摩爾吸光系數二、單項選擇題１.可見光的波長范圍是()Ａ.２００~４００nm

Ｂ.４００~７６０nmＣ.２００~７６０nmＤ.３６０~８００nm２.下列敘述錯誤的是()Ａ.光的能量與其波長成反比Ｂ.有色溶液濃度越大，對光的吸收就越強烈Ｃ.物質對光的吸收有選擇性Ｄ.光的能量與其頻率成反比３.某有色溶液的物質的量濃度為ｃ,在一定條件下用１cm比色杯測得吸光度為Ａ，則摩爾吸光系數ε為()Ａ.cA

Ｂ.cMＣ.D４.關于光的性質，描述正確的是()Ａ.光具有波粒二象性

Ｂ.光具有發散性Ｃ.光具有顏色

Ｄ.本質是單色光５.某吸光物質的吸光系數很大，則表明()Ａ.該物質溶液的濃度很大

Ｂ.測定該物質的靈敏度高Ｃ.入射光的波長很大

Ｄ.該物質的相對分子質量很大６.相同條件下，測定甲、乙兩份同一有色物質溶液的吸光度。若甲溶液用１ｃｍ吸收池，乙溶液用２ｃｍ吸收池進行測定，結果吸光度相同，甲、乙兩溶液濃度的關系為()Ａ.ｃ甲

＝ｃ乙

Ｂ.ｃ乙＝４ｃ甲Ｃ.ｃ乙＝２ｃ乙

Ｄ.ｃ乙＝２ｃ甲７.在符合光的吸收定律條件下，有色物質的濃度、最大吸收波長、吸光度三者的關系是()Ａ.增加、增加、增加

Ｂ.增加、減小、不變Ｃ.減小、增加、減小

Ｄ.減小、不變、減小８.吸收曲線是在一定條件下以入射光波長為橫坐標、吸光度為縱坐標所描繪的曲線，又稱為()Ａ.工作曲線

Ｂ.Ａ－λ曲線

Ｃ.Ａ－ｃ曲線

Ｄ.滴定曲線９.標準曲線是在一定條件下以濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標所描繪的曲線，也可稱為()Ａ.Ａ－λ曲線

Ｂ.Ａ－ｃ曲線Ｃ.滴定曲線

Ｄ.ｐＨ－Ｖ曲線１０.紫外－可見分光光度計的基本結構可分為()Ａ.兩個部分

Ｂ.三個部分Ｃ.四個部分

Ｄ.五個部分１１.紫外－可見分光光度法定量分析的理論依據是()Ａ.吸收曲線

Ｂ.吸光系數Ｃ.光的吸收定律

Ｄ.標準溶液１２.下列說法正確的是()Ａ.吸收曲線與物質的性質無關Ｂ.吸收曲線的基本形狀與溶液濃度無關Ｃ.濃度越大，吸光系數越大Ｄ.吸收曲線是一條通過原點的直線１３.測定大批量試樣時，適宜的定量方法是()Ａ.標準曲線法

Ｂ.標準對比法Ｃ.吸光系數法

Ｄ.三種方法同時使用１４.紫外－可見分光光度法是基于被測物質對()Ａ.光的發射

Ｂ.光的散射Ｃ.光的折射

Ｄ.光的吸收１５.下列有關顯色劑的敘述，正確的是()Ａ.本身必須是無色試劑并且不與被測物質發生反應Ｂ.本身必須是有顏色的物質并且能吸收測定波長的輻射Ｃ.能夠與被測物質發生氧化還原反應并生成鹽Ｄ.在一定條件下能與待測物質發生反應并生成穩定的吸收性物質１６.測定溶液的吸光度時，入射光波長通常選擇()Ａ.λmax

Ｂ.λmin

Ｃ.白光

Ｄ.任意波長１７.下列說法錯誤的是()Ａ.標準曲線與物質的性質無關Ｂ.吸收曲線的基本形狀與溶液濃度無關Ｃ.濃度越大，吸光系數越大Ｄ.從吸收曲線上可以找到最大吸收波長三、計算題１.將已知濃度為２.００

mg/L的蛋白質溶液用堿性硫酸銅溶液顯色后，在５４０nm波長下測得其吸光度為０.３００。另取試樣溶液同樣處理后，在同樣條件下測得其吸光度為０.６９９，求試樣中蛋白質溶液的濃度。２.用雙硫腙測定cd2+溶液的吸光度Ａ時，cd2+(cd的相對原子質量為１１２)的濃度為１４０ug/L，在５２５nm波長處，用１cm的吸收池，測得吸光度Ａ＝０.２２０，試計算摩爾吸光系數。３.維生素Ｄ２在２６４nm處的摩爾吸收系數ε為１８２００。用２０cm吸收池測定，如果要控制吸光度Ａ在０.１８７~０.６９９，應使維生素D2溶液的濃度在什么范圍內?４.每升含鐵３５.０mg的溶液，吸取此溶液５.００ｍｌ于１００.０ｍｌ容量瓶中，用１cm吸收池于５０８nm處測得吸光度為０.３４８，計算比吸光系數，摩爾吸光系數的數值為多少?５.稱取０.５００g鋼樣，溶于酸后，使其中的錳(相對原子質量為５５)氧化成高錳酸根離子，將溶液稀釋至１００ml，再稀釋１０倍后，用２cm厚度的比測皿，在波長５２５nm處測得吸光度為０.４２０，在相同條件下，測得高錳酸根標準溶液(１.５２×１０-4mol/L)的吸光度為０.３５０，試計算鋼樣中錳的質量分數，請回答選用什么儀器將溶液稀釋至１００ml?６.利用分光光度法測定血清中鎂的含量,取濃度為１０.０mmol/L的鎂標準溶液１０.０ml置于容量瓶中。加３.００ml顯色劑進行顯色后。稀釋至刻線。搖勻。測得吸光度為０.３２；另取待測血清５０.０ml置于另一相同規格的容量瓶中。加３.００ml顯色劑進行顯色后。稀釋至刻線。搖勻。在相同條件下測得吸光度為０.４７。試計算血清中鎂的含量。四、簡答題ABDECF紫外－可見分光光度法的特點有哪些光的吸收定律的內容是什么?偏離光的吸收定律的主要因素有哪些試敘述紫外－可見分光光度計的主要部件及其作用請說出幾種常用的參比溶液測定試樣時,吸光度的讀數應控制在０.２~０.７,若吸光度讀數不在此范圍,可采用哪些方法進行調整試敘述紫外－可見分光光度法常用的定量分析方法任務三實驗實驗十五高錳酸鉀溶液吸收光譜曲線的繪制實驗十六高錳酸鉀溶液的含量測定（標準曲線法）一、實驗目標ABCD.掌握分光光度計的正確使用方法.掌握繪制吸收曲線的方法和正確選擇測定波長掌握繪制標準曲線的方法掌握用標準曲線法測定高錳酸鉀溶液的含量二、實驗原理物質呈現的顏色與光有著密切關系，溶液之所以呈現不同的顏色，是由于該溶液對光具有選擇性吸收的緣故。通常用光吸收曲線來描述物質對不同波長范圍光的選擇性吸收。其方法是將不同波長的光依次通過某一定濃度和厚度的有色溶液，分別測出它們對各種波長光的吸收程度，用吸光度Ａ表示，以波長λ為橫坐標，吸光度Ａ為縱坐標，畫出的曲線即為光的吸收曲線，又稱為吸收光譜曲線。光吸收程度最大處的波長稱為最大吸收波長，用λmax表示。高錳酸鉀溶液為紫紅色，在５２５nm波長處有最大吸收，配制高錳酸鉀標準系列，固定在波長５２５nm，依次測定其吸光度Ａ，再測定樣品溶液的吸光度Ａ，根據高錳酸鉀溶液標準系列的濃度和對應的吸光度，以濃度ｃ為橫坐標，吸光度Ａ為縱坐標，繪制Ａ－ｃ曲線，從曲線上查出對應樣品溶液的濃度即可。三、實驗試劑與儀器A１.實驗試劑KMnO4固體、基準物質Na2C2O4、3mol/L的H2SO4

溶液、３％H2O2溶液等。B２.實驗儀器分析天平、托盤天平、稱量瓶、酸式滴管、移液管、錐形瓶、量筒、燒杯、洗瓶、棕色試劑瓶等。三、實驗試劑與儀器A１.實驗試劑固體KMnO4(Ａ.Ｒ.)、樣品溶液等。B２.實驗儀器分析天平、稱量瓶、燒杯、容量瓶、移液管、７２２型分光光度計、５０.００ml比色管(１號)、２５.００ml(２、３、４、５、６、７號)比色管、比色架等。四、分光光度計的使用方法分光光度計型號很多，不同型號的分光光度計使用方法略有不同，但原理都相似。因此，學生在使用之前要對照儀器，認真閱讀儀器使用說明書，在教師指導下，掌握分光光度計的操作方法，正確使用。下面以７２２型分光光度計為例，介紹其使用方法，７２２型分光光度計外形如圖８-９所示。四、分光光度計的使用方法１.接通電源，打開儀器開關，預熱２０分鐘。２.按“功能鍵”將測量模式轉換到Ｔ狀態，Ｔ指示燈亮。３.用波長選擇旋鈕設計所需波長。４.打開樣品室蓋，放進黑體(０％Ｔ校具)，蓋上樣品室蓋，在顯示器不是零的狀況下，按０％鍵，使Ｔ顯色為０.０００，取出黑體。５.將參比溶液和被測溶液分別倒入比色皿中３/４處，用擦鏡紙擦清外壁，打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色槽中，蓋上樣品室蓋。６.在Ｔ/Ａ狀態下，將參比溶液推入光路中，按１００％鍵，直至顯色“１００％Ｔ”或“０.０００Ａ”。當參比溶液調成１００％Ｔ或０.０００Ａ后，將被測溶液推入光路中，這時顯示器上顯示出被測溶液的Ｔ或Ａ，并記錄。四、分光光度計的使用方法７.比色完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。８.比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。９.注意事項(１)儀器應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩的工作臺上，室內照明不宜太強。天熱時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發光不穩定。(２)使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕的功能。在未接通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。四、分光光度計的使用方法(３)在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于零刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調節。(４)用于盛放參比溶液和待測溶液的吸收池應該相互匹配，即測定條件不變。吸收池有兩個透光面，其內壁和外壁都要特別注意保護，避免摩擦，避免留下指紋、痕跡、油膩和污物。如果外壁沾有殘液，只能用軟紙或絹布吸干。五、實驗內容１.

０.１２５g/L

KMnO4溶液的配制精密稱取固體KMnO4(Ａ.Ｒ.)試劑０.０１２５g，置于燒杯中，用蒸餾水溶解后，定容