5 培養基適用性檢查驗證方案

有限公司方案編號：，版本:V1.0第第頁文件編號版本V1.0編制日期審核日期批準日期培養基適用性檢查驗證方案文檔控制信息制定/修訂日期修訂內容版本總頁數制定/修訂審核批準創建V1.05目的：本再驗證方案用于對需氧菌、霉菌及酵母菌計數用的培養基進行培養基的適用性檢查。本次驗證的目的是胰酪大豆胨瓊脂培養基和沙氏葡萄糖瓊脂培養基是否適合需氧菌、霉菌及酵母菌計數總數測定。標準：《中國藥典》2020年版1105非無菌產品微生物限度檢查法。職責：部門責任人職位職責管代組長負責方案、偏差和報告的最后批準。實驗室組員負責驗證方案和報告的編制，并對驗證過程進行監控和檢驗，并負責對偏差作出處理意見。合格標準：被檢固體培養基上菌落平均數與對照培養基上的菌落比值應在0.5-2的范圍內，且菌落形態大小與對照培養基上的菌落一致。實驗材料：6.1被驗證產品：胰酪大豆胨瓊脂培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基、R2A培養基6.2設備準備：6.2.1自動立式壓力蒸汽滅菌器6.2.2潔凈工作臺6.2.3生物安全柜6.2.4生化培養箱6.2.5干燥箱6.3驗證用培養基相關信息培養基名稱生產廠家批號胰酪大豆胨瓊脂培養基有限公司1103361沙氏葡萄糖瓊脂培養基有限公司230207A10R2A培養基有限公司11030826.4驗證用菌種驗證菌種培養基培養溫度培養時間驗證菌種培養基培養溫度培養時間金黃色葡萄球菌胰酪大豆胨瓊脂培養基30-35℃72小時銅綠假單胞菌胰酪大豆胨瓊脂培養基30-35℃72小時枯草芽孢桿菌胰酪大豆胨瓊脂培養基30-35℃72小時金黃色葡萄球菌R2A培養基30-35℃72小時銅綠假單胞菌R2A培養基30-35℃72小時枯草芽孢桿菌R2A培養基30-35℃72小時白色念球菌沙氏葡萄糖瓊脂培養基20-25℃120小時黑曲霉沙氏葡萄糖瓊脂培養基20-25℃120小時6.5菌液制備：按照6.4規定程序培養各試驗菌種,分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至10ml胰酪大豆胨液體培養基中，30~35℃培養18~24小時，分別挑取菌落接種加入pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml中，采取10倍遞增稀釋法，制成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。接種白色念株菌的新鮮培養物至10ml沙氏葡萄糖液體培養基中，20~25℃培養2~3天，挑取菌落接種到pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml中，采取10倍遞增稀釋法，制成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。接種黑曲霉的新鮮培養物至10ml沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，20~25℃培養5~7天，直到獲得豐富的孢子，加入3~5ml含有0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫，吸至無菌管中，挑取菌落接種到含有0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml中，采取10倍遞增稀釋法，制成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內使用，若保存在2-8℃，可在24小時內使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2-8℃在驗證過的貯存期內使用。適用性檢查：7.1培養基適用性檢查取金黃的葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌（50-100cfu/ml）各1ml，每株試驗菌平行制備2個試驗，分別注入2個無菌平皿中，立即注入胰酪大豆胨瓊脂培養基，混勻，凝固，倒置培養30-35℃.72小時計數。取白色念珠菌、黑曲霉（50-100cfu/ml）各1ml，每株試驗菌平行制備2個試驗，分別注入2個無菌平皿中，立即注入沙氏葡萄糖瓊脂培養基，混勻，凝固，倒置培養20-25℃.120小時計數。取金黃的葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌（50-100cfu/ml）各1ml，每株試驗菌平行制備2個試驗，分別注入2個無菌平皿中，立即注入R2A培養基，混勻，凝固，倒置培養30-35℃.72小時計數。7.2陰性對照為確認試驗條件是否符合要求，應進行陰性對照試驗。陰性對照試驗應無菌生長。驗證記錄培養基適用性檢查記錄表培培養基名稱培養基批號培培養基廠家培養基規格檢驗報告試驗菌試驗時間稀釋級被檢培養基對照培養基生長比率菌落形態對比陰性計數平均數陰性計數平均數標準：陰性對照應無菌生長，被檢培養基上的菌落平均數與對照培養基上的平均數的比值應在0.5-2范圍內，且菌落形態大小應與對照培養基上的一致。結論□符合規定□不符合規定檢驗人審核日期日期培養基適用性檢查記錄表培培養基名稱培養基批號培培養基廠家培養基規格檢驗報告試驗菌試驗時間稀釋級被檢培養基對照培養基生長比率菌落形態對比陰性計數平均數陰性計數平均數標準：陰性對照應無菌生長，被檢培養基上的菌落平均數與對照培養基上的平均數的比值應在0.5-2范圍內，且菌落形態大小應與對照培養基上的一致。結論□符合規定□不符合規定檢驗人審核日期日期培養基適用性檢查記錄表培培養基名稱培養基批號培培養基廠家培養基規格檢驗報告試驗菌試驗時間稀釋級被檢培養基對照培養基生長比率菌落形態對比陰性計數平均數陰性計數平均數標準：陰性對照應無菌生長，被檢培養基上的菌落平均數與對照培養基上的