試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)

細(xì)菌鑒定技術(shù)試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!常用細(xì)菌生化反應(yīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)（靛基質(zhì)試驗(yàn)）甲基紅試驗(yàn)V-P（Voges-Proskauer）試驗(yàn)枸櫞酸鹽（或檸檬酸鹽）利用試驗(yàn)克氏雙糖鐵（KIA）復(fù)合試驗(yàn)動(dòng)力、吲哚及脲酶（MIU）復(fù)合試驗(yàn)試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!1.糖發(fā)酵試驗(yàn)【原理】：各種細(xì)菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，對(duì)糖（苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的分解后僅產(chǎn)酸，有的分解后產(chǎn)酸產(chǎn)氣，故可用來(lái)鑒別細(xì)菌。【方法】：將大腸埃希菌和傷寒沙門菌分別接種葡萄糖、乳糖發(fā)酵管，35oC培養(yǎng)18-24h觀察結(jié)果。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!1.糖發(fā)酵試驗(yàn)【結(jié)果】：首先確定細(xì)菌是否生長(zhǎng)，細(xì)菌生長(zhǎng)者培養(yǎng)基呈混濁狀：1）不分解糖，培養(yǎng)基顔色與接種前無(wú)變化，以“-”表示；2）分解糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色，以“+”表示；3）分解糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，除培養(yǎng)基顔色變化外，倒管中還有氣泡，以“⊕”表示。大腸埃希菌分解葡萄糖和乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，傷寒沙門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!2.吲哚試驗(yàn)（靛基質(zhì)試驗(yàn)）【原理】：有些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，與吲哚試劑形成紅色化合物。【方法】：大腸埃希菌和傷寒沙門菌分別接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，35oC18-24h后，加入吲哚試劑數(shù)滴，靜置分層，觀察結(jié)果。【結(jié)果】：在培養(yǎng)物液面上層呈玫瑰紅色為陽(yáng)性，不變色者為陰性。大腸埃希菌為陽(yáng)性，傷寒沙門菌為陰性。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!3.甲基紅試驗(yàn)【原理】：某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸可進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸等酸性物質(zhì)，故培養(yǎng)基pH在4.5以下，加入甲基紅指示劑后呈紅色（陽(yáng)性）；有些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸進(jìn)一步化為醇、酮等非酸性物質(zhì)，使培養(yǎng)基pH在6.2以上，加入甲基紅指示劑后呈黃色（陰性）。【方法】：大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌分別接種葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，35oC18-24h，加入甲基紅指示劑2-3滴觀察結(jié)果。【結(jié)果】：紅色為陽(yáng)性，黃色為陰性。大腸埃希菌為陽(yáng)性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!4.V-P（Voges-Proskauer）試驗(yàn)【原理】：某些細(xì)菌分解葡萄糖生成丙酮酸，進(jìn)一步脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境下被氧化成二乙酰，后者與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色胍縮二乙酰，為VP試驗(yàn)陽(yáng)性。若培養(yǎng)基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酐，以加速其反應(yīng)。【方法】：大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌分別接種于葡萄糖蛋白胨水中，35oC，24-48h，加入VP試劑甲液和乙液各1滴，充分搖動(dòng)，觀察。【結(jié)果】：紅色為陽(yáng)性，若為陰性應(yīng)再培養(yǎng)4h觀察，仍無(wú)紅色者為陰性。大腸埃希菌陰性，產(chǎn)氣腸桿菌陽(yáng)性。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!5.枸櫞酸鹽（或檸檬酸鹽）利用試驗(yàn)【原理】：當(dāng)細(xì)菌可以利用銨鹽作為唯一氮源，同時(shí)檸檬酸鹽為惟一碳源時(shí)，可在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，分解檸檬酸鹽為碳酸鹽，使培養(yǎng)基變堿，指示劑溴麝香草酚藍(lán)由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性，培養(yǎng)基不變色（綠色）為陰性。【方法】：大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌分別接種于檸檬酸鹽培養(yǎng)基中，35oC，24-48h，觀察。【結(jié)果】：菌苔出現(xiàn)，培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性。細(xì)菌不能生長(zhǎng)，培養(yǎng)基不變色（綠色）為陰性。產(chǎn)氣腸肝菌為陽(yáng)性，大腸埃希菌為陰性。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!6.克氏雙糖鐵（KIA）復(fù)合試驗(yàn)【原理】：該培養(yǎng)基用酚紅指示劑，在酸性時(shí)呈黃色，堿性時(shí)呈紅色。細(xì)菌如能發(fā)酵乳糖和葡萄糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。如只發(fā)酵葡萄糖不發(fā)酵乳糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接觸空氣而氧化揮發(fā)，從而使斜面部分保持原來(lái)的紅色；底層由于是在相對(duì)缺氧狀態(tài)下，細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖所生成的酸類物質(zhì)不被氧化揮發(fā)而保持黃色。如細(xì)菌分解蛋白產(chǎn)生硫化氫，則與硫化亞鐵作用生成黑色的硫化鐵，使培養(yǎng)基變黑。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!雙糖鐵培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)管痢疾桿菌KA－－斜面：K紅色底層：A黃色傷寒桿菌KA－＋大腸桿菌AA＋－沒產(chǎn)氣沒產(chǎn)H2S產(chǎn)H2S產(chǎn)氣試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!

大腸埃希菌MIU（＋＋－）普通變形桿菌MIU（＋＋＋）M：動(dòng)力I：吲哚U：尿酶試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!大腸埃希菌IMViC試驗(yàn)（＋＋－－）

右側(cè)為對(duì)照（－－＋＋）

I：吲哚，M：甲基紅，Vi：VP，C：枸櫞酸鹽試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!沙門菌IMViC試驗(yàn)（－＋－－）試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!志賀菌IMViC試驗(yàn)（－＋－－）試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!肺炎克雷伯菌IMViC試驗(yàn)（－－＋＋）試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!變形桿菌KIA（KA++）MIU（++/-+）試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!【原理】氧化酶或稱細(xì)胞色素氧化酶，是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。作氧化酶試驗(yàn)時(shí)，此酶首先使細(xì)胞色素C氧化，然后氧化型細(xì)胞色素C再使對(duì)苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。【方法】取濾紙一角，沾取菌落少許，加試劑一滴，陽(yáng)性者立即粉紅色，并于5-10秒內(nèi)呈現(xiàn)深紫色。氧化酶試驗(yàn)銅綠假單胞菌：陽(yáng)性大腸埃希菌：陰性試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!【原理】某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶分解尿素，產(chǎn)氨使培養(yǎng)基變堿。

【方法】將被檢菌接種尿素培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。陰性時(shí)應(yīng)繼續(xù)觀察4d。

【結(jié)果】酚紅指示劑變紅為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴Ｗ冃螚U菌陽(yáng)性，大腸埃希菌陰性。

尿素酶試驗(yàn)試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!涂片干燥固定染色水洗鏡檢簡(jiǎn)單染色方法干燥試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!注意：水洗時(shí)，不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端流下。水流不宜過(guò)急，過(guò)大，以免涂片薄膜脫落。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!操作過(guò)程取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→石炭酸復(fù)紅加溫染色8~10分鐘后→用3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鐘，脫色時(shí)輕搖玻片，直到涂片顏色脫去為止水洗后，用堿性美藍(lán)復(fù)染1分鐘→水洗，印干→鏡檢試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!細(xì)菌接種：固體平板培養(yǎng)基接種方法：分區(qū)劃線法固體斜面培養(yǎng)基接種方法：劃線法固體高層斜面培養(yǎng)基接種方法：穿刺劃線法半固體培養(yǎng)基接種方法：穿刺法液體培養(yǎng)基接種方法：液體接種法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容復(fù)習(xí)使用器材接種環(huán)接種針/接種環(huán)接種針接種針接種環(huán)/接種針試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!－+試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!－+試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!6.克氏雙糖鐵（KIA）復(fù)合試驗(yàn)【方法】：將待檢菌接種于克氏雙糖鐵培養(yǎng)基（底層穿刺，上層斜面劃線），35oC，24h，觀察。【結(jié)果】：發(fā)酵乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則上層和底層均呈黃色且有氣泡產(chǎn)生；只發(fā)酵葡萄糖而不發(fā)酵乳糖，則底層變黃，上層仍為紅色。如底層變黑，說(shuō)明該菌產(chǎn)生硫化氫，生成黑色的硫化鐵沉淀。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁(yè)!7.動(dòng)力、吲哚及脲酶（MIU）復(fù)合試驗(yàn)【原理】：培養(yǎng)基為含尿素、蛋白胨的半固體培養(yǎng)基，指示劑為酚紅。具色氨酸酶的細(xì)菌能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，加入吲哚試劑后，培養(yǎng)基上層的吲哚會(huì)變紅；具脲酶的細(xì)菌能分解尿素產(chǎn)氨，使整個(gè)培養(yǎng)基變堿呈紅色；有動(dòng)力的細(xì)菌沿穿刺線擴(kuò)散生長(zhǎng)。【方法】：將大腸埃希菌和普通變形桿菌穿刺線接種于MIU培養(yǎng)基，35oC，18-24h，觀察動(dòng)力和脲酶反應(yīng)后，再滴加吲哚試劑。【結(jié)果】：擴(kuò)散生長(zhǎng)為動(dòng)力陽(yáng)性；滴加吲哚試劑后呈玫瑰紅色為陽(yáng)性；培養(yǎng)基變紅脲酶陽(yáng)性。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁(yè)!請(qǐng)記住：大腸埃希菌KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）上層變黃下層變黃產(chǎn)氣沒產(chǎn)H2S試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁(yè)!傷寒沙門菌KIA（KA－＋）MIU（＋－－）試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁(yè)!志賀菌KIA（KA－－）MIU（－－－）試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁(yè)!肺炎克雷伯菌KIA（AA＋＋）、MIU（－－＋）

試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁(yè)!產(chǎn)氣腸桿菌IMViC試驗(yàn)（－－＋＋）試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁(yè)!血漿凝固酶試驗(yàn)：1）原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生結(jié)合型血漿凝固酶（凝聚因子），可使血漿中可溶性的纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白，附著于細(xì)菌表面，在玻片上形成凝塊；游離型的血漿凝固酶則可使試管中的血漿發(fā)生凝固。金黃色葡萄球菌的凝固酶陽(yáng)性，表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的凝固酶陰性。試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁(yè)!【原理】過(guò)氧化氫酶可使過(guò)氧化氫分解為分子態(tài)氧。【方法】滴加3%過(guò)氧化氫溶液數(shù)滴于玻片上，挑取固體培養(yǎng)基上的菌落少許于過(guò)氧化氫溶液，觀察結(jié)果。【結(jié)果】30s內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡者為陽(yáng)性。

過(guò)氧化氫酶（觸酶）試驗(yàn)葡萄球菌：陽(yáng)性鏈球菌：陰性試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁(yè)!【原理】當(dāng)細(xì)菌能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時(shí)，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)分解枸櫞酸鈉，使培養(yǎng)基變堿。【方法】在枸櫞酸鹽瓊脂斜面上濃密劃線，接種被檢菌，于35℃培養(yǎng)1～4d，逐日觀察結(jié)果。

【結(jié)果】枸櫞酸鹽培養(yǎng)基斜面上有細(xì)菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)基變藍(lán)為陽(yáng)性；無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)、顏色不變（綠色）為陰性。大腸埃希菌：陰性產(chǎn)氣腸桿菌：陽(yáng)性

枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)試驗(yàn)考試復(fù)習(xí)內(nèi)容細(xì)菌鑒定技術(shù)共41頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁(yè)!⑴初染將玻片置于玻片擱架上，加草酸銨結(jié)晶紫染色液(加量以蓋滿菌膜為度)，染色1min。傾去染色液，用自來(lái)水小心地沖洗。⑵媒染滴加(Lugol)碘液，染1min，水洗。⑶脫色滴加95%乙醇，脫色30s立即水洗，以終止脫色。⑷復(fù)染滴加蕃紅，染色30s，水洗。最后用吸水紙輕輕吸