標準解讀
《GB/T 5522-1985 糧食、油料檢驗 過氧化氫酶活動度測定法》是一項國家標準,專門用于測定糧食和油料中過氧化氫酶的活性。該標準詳細規定了從樣品準備到最終結果計算的一系列步驟,以確保檢測過程的準確性和可重復性。
首先,在樣品制備方面,需要將待測樣品研磨成細粉,并通過一定目數的篩子篩選,保證顆粒大小均勻,便于后續實驗操作。對于不同的糧食或油料種類,可能還需要采取特定的預處理措施來提高酶活性測定的準確性。
接下來是提取液制備階段,根據標準要求,使用適量的緩沖溶液與樣品混合,經過充分攪拌后離心分離得到上清液作為過氧化氫酶的提取物。這里所使用的緩沖溶液類型及其pH值等參數均需嚴格按照標準給出的具體條件執行。
然后進入關鍵的酶活測定環節,采用分光光度計測量在特定波長下反應體系吸光度的變化情況。通過向含有底物(如過氧化氫)的溶液中加入一定量的酶提取液,并記錄一段時間內吸光度隨時間變化的數據,可以間接反映出過氧化氫酶催化分解過氧化氫的速度快慢,進而計算出其相對活性單位。
最后,依據實驗數據及標準提供的公式進行計算,得出每克干物質中含有多少單位的過氧化氫酶活性。需要注意的是,在整個實驗過程中都必須嚴格遵守實驗室安全規范以及正確操作儀器設備,同時做好詳細的實驗記錄,以便于后期分析比較不同批次之間的差異性。
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文檔簡介
UDC(633.1+633.85).001.4X10中華人民共和國國家標準GB5522—85糧食、油料檢驗過氧化氫酶活動度測定法InspectionofgrainandoilseedsMethodsfordeterminationofhydrogenperoxidaseactivity1985-11-02發布1986-07-01實施家標唯局國批準
中華人民共和國國家標準糧食、油料檢驗過氧化氫酶活動度測定法GB5522-85中國標準出版社出版發行北京西城區復興門外三里河北街16號郵政編碼:100045電話:63787337、637874471986年5月第一版2006年3月電子版制作書號:155066·1-23816版權專有侵權必究舉報電話:010)68533533
中華人民共和國國家標準UDC(633.1+633.85.001.4糧食、油料檢驗GB5522-85過氧化氫酶活動度測定法lnspectionofgrainandoilseedsMethodsfordeterminationofhydrogenperoxidaseactivity本標準適用于商品糧食過氧化氫酶活動度的測定儀器和用具1.1恒溫水浴鍋;1.2電爐:1.3離心機或吸濾裝置;1.4推形瓶:100mli1.5量筒:10、15m1g1.6移液管:5、10,20m11.7研缽:1.88滴定管、細口瓶、漏斗等。2試劑2.113%過氧化氫溶液:取30%過氧化氫溶液3ml加水稀釋至30ml2.2:10%硫酸溶液;2.30.1N高錳酸鉀溶液;2.4pH7.7索倫遜磷酸鹽緩沖液:甲甲液,稱取礁酸氫二鈉11.876g溶于11水中。乙液,稱取磷酸二氫鉀9.078g溶于11水中。臨用時,甲、乙液按9:1混合。2.5石英砂或用干凈的玻璃片研制成的細砂。3操作方法3.1過氧化氫酵的提取:稱取試樣(能換算成無水試樣1g),放入研缽中,加少量細砂,量取緩沖被50ml,先倒出5~10m1于研體中研磨試樣,然后經漏斗倒入館形瓶中,用剝余的緩沖液洗凈研體和漏斗,再把洗液倒入錐形瓶內,振搖后靜置2~3h,用吸濾法或離心沉淀法獲得透明的提取液。3.2酶活動度的測定:搖勾提取液,吸取20ml注入錐形瓶中,加入20ml水和3ml39過氧化氫溶液,在室溫下放置15~30mia,加入5m110%硫酸溶液,搖勾,用0.1N高錳酸鉀溶液滴定剝余的過氧化氫,記下用去的高錳酸鉀溶液廷升數(Y,)。3.3對照試驗;吸取20ml提取液注入錐形瓶中,置于沸水浴中加熱5mia,或用直接煮沸法破壞過氧化氫酶。加20ml水和3ml3%過氧化氫溶液于錐形瓶中,在室溫下放置15~30min,再加入10%碗酸5ml
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