GB/T 36875-2018豬瘟病毒RT-nPCR檢測方法

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T36875—2018

豬瘟病毒RT-nPCR檢測方法

MethodofRT-nPCRfordetectionofclassicalswinefevervirus

2018-09-17發布2019-04-01實施

國家市場監督管理總局發布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

豬瘟病毒RT-nPCR檢測方法

GB/T36875—2018

*

中國標準出版社出版發行

北京市朝陽區和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區三里河北街號

16(100045)

網址

:

服務熱線

:400-168-0010

年月第一版

20189

*

書號

:155066·1-61269

版權專有侵權必究

GB/T36875—2018

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業農村部提出

。

本標準由全國動物衛生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位軍事醫學科學院軍事獸醫研究所中國獸醫藥品監察所

:、。

本標準主要起草人郭煥成王琴徐璐馮燁張乾義趙啟祖鄒興啟朱元源涂長春

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36875—2018

豬瘟病毒RT-nPCR檢測方法

1范圍

本標準規定了豬瘟病毒特異的反轉錄套式聚合酶鏈反應方法的技術要求

-(RT-nPCR)。

本標準適用于可能感染豬瘟病毒的豬臟器血液糞便和細胞培養物中豬瘟病毒核酸的檢測可用

、、,

于豬瘟的診斷和監測

。

本標準的豬瘟病毒方法不能區分感染的豬瘟病毒野毒株和免疫的疫苗株

RT-nPCR。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

乙二胺四乙酸二鈉

EDTA-2Na:(ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalt)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反轉錄套式聚合酶鏈反應

RT-nPCR:-(reversetranscriptionandnestedpolymerasechainreac-

tion)

3實驗前準備

31實驗室條件

.

311實驗室分區

..

實驗室分區包括核酸提取區反應體系配制區配液區擴增區電泳區流程順序為

PCR、PCR———、、。

核酸提取區配液區擴增區電泳區各區儀器和耗材專用

→→→。。

312實驗室應配備的儀器及器材

..

3121儀器級生物安全柜臺式高速冷凍離心機普通冰箱和分析天平擴增

...:Ⅱ、、(-20℃4℃)、、PCR

儀電泳儀電泳槽紫外凝膠成像儀或紫外分析儀組織研磨器扁桃體采樣器微波爐單道可調移

、、、()、、、、

液器

(2μL、10μL、200μL、1000μL)。

3122器材無菌注射器眼科剪眼科鑷稱量紙棉拭子滅菌牙簽量筒錐形瓶

...:、、、、、、500mL、500mL、

一次性無酶吸頭無酶離心管薄壁管

RNA(10μL、200μL、1000μL)、1.5mLRNA、0.2mLPCR。

32化學藥品及試劑

.

321總提取試劑

..RNATrizol。

322電泳緩沖液的制備配制方法見附錄

..TAE,A。

323瓊脂糖凝膠配制方法見附錄

..1%,A。

324其他試劑反轉錄酶緩沖液酶抑制劑

..:200U/μLM-MLV,5×M-MLV,40U/μLRNA,DEPC-

聚合酶緩沖液2+堿基隨機引物

H2O,5U/μLExTaqDNA,10×ExTaq(MgPlus),6(50μmol/L),

上樣緩沖液