標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 35337-2017 葡萄黃點(diǎn)類病毒檢疫鑒定方法》是針對(duì)葡萄黃點(diǎn)類病毒(Grapevine yellow speckle viroid, GYSVd)制定的一份國家標(biāo)準(zhǔn),主要應(yīng)用于進(jìn)出口貿(mào)易、國內(nèi)流通以及科學(xué)研究等領(lǐng)域中對(duì)該病毒的檢測與鑒定。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從樣品采集到最終結(jié)果判定的一系列操作流程和技術(shù)要求。
在樣品采集方面,標(biāo)準(zhǔn)明確了采樣時(shí)間應(yīng)選擇在發(fā)病高峰期或癥狀明顯期進(jìn)行;對(duì)于田間植株,推薦選取具有典型病癥特征的新鮮葉片作為待檢材料;同時(shí)強(qiáng)調(diào)了樣品保存條件的重要性,比如需要將采集到的樣本迅速放入保鮮袋內(nèi),并盡快送至實(shí)驗(yàn)室處理,以保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)的有效性。
關(guān)于樣品制備部分,《GB/T 35337-2017》提供了兩種不同的核酸提取方法供使用者選擇:一種是基于硅膠膜柱的商業(yè)試劑盒法,另一種則是傳統(tǒng)的酚/氯仿抽提結(jié)合異丙醇沉淀技術(shù)。無論采用哪種方式,都需嚴(yán)格按照說明書或既定步驟執(zhí)行,確保獲得高質(zhì)量的RNA用于后續(xù)分析。
該標(biāo)準(zhǔn)還介紹了RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)的具體參數(shù)設(shè)置及優(yōu)化建議,包括引物設(shè)計(jì)原則、退火溫度控制等關(guān)鍵因素,旨在提高目標(biāo)序列特異性擴(kuò)增效率的同時(shí)降低非特異性產(chǎn)物生成的可能性。此外,為了進(jìn)一步驗(yàn)證陽性結(jié)果的真實(shí)性,標(biāo)準(zhǔn)建議使用巢式PCR或者直接測序的方法來進(jìn)行確認(rèn)。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2017-12-29 頒布
- 2018-07-01 實(shí)施
文檔簡介
ICS6502001
B16..
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T35337—2017
葡萄黃點(diǎn)類病毒檢疫鑒定方法
DetectionandidentificationofGrapevineyellowspeckleviroid
2017-12-29發(fā)布2018-07-01實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
GB/T35337—2017
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任
。。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口
(SAC/TC271)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中華人民共和國北京出入境檢驗(yàn)檢疫局中國農(nóng)業(yè)科
:、、
學(xué)院植物保護(hù)研究所
。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張永江鄧叢良駱衛(wèi)峰趙曉麗呂玉峰張志想辛言言
:、、、、、、。
Ⅰ
GB/T35337—2017
葡萄黃點(diǎn)類病毒檢疫鑒定方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了葡萄黃點(diǎn)類病毒的檢疫鑒定方法
。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于可能帶有葡萄黃點(diǎn)類病毒的葡萄繁殖材料的檢疫鑒定
。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
3葡萄黃點(diǎn)類病毒基本信息
學(xué)名Graevineellowseckleviroid
:pyp。
縮寫
:GYSVd。
異名葡萄黃斑類病毒葡萄黃痘類病毒
:、。
分類地位馬鈴薯紡錘塊莖類病毒科Posiviroidae蘋果銹果類病毒屬Ascaviroid
:(p)、(p)。
葡萄黃點(diǎn)類病毒的其他信息參見附錄
A。
4方法原理
類病毒檢測主要針對(duì)其核酸序列主要的方法有和核酸分子雜交
。RT-PCR。
5儀器設(shè)備主要用具和主要試劑
、
51儀器設(shè)備
.
電子天平感量普通天平感量高速冷凍離心機(jī)小型瞬時(shí)離心機(jī)普通冰箱超
(0.001g)、(0.1g)、、、、
低溫冰箱制冰機(jī)渦旋振蕩器磁力攪拌器高壓滅菌鍋計(jì)儀微波爐電泳儀電
(-80℃)、、、、、pH、PCR、、、
泳槽凝膠分析成像系統(tǒng)實(shí)時(shí)熒光儀雜交爐塑料薄膜封口機(jī)紫外交聯(lián)儀暗箱搖床恒溫水
、、PCR、、、、、、
浴鍋組織破碎儀等
、。
52主要用具
.
可調(diào)移液器無酶吸頭
(2.5μL、10μL、20μL、200μL、1000μL、5000μL)、RNA(10μL、20μL、
無離心管研缽研棒磁性分離架
200μL、1000μL、5000μL)、RNase(1.5mL、5mL、10mL)、、、、PCR
反應(yīng)管實(shí)時(shí)熒光孔反應(yīng)板雜交瓶雜交膜雜交袋光片
(200μL)、96、、、、X。
53主要試劑
.
除另有規(guī)定外所有試劑均為分析純實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合中相關(guān)規(guī)定
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