第六章 水產品中農藥、獸藥殘留的檢測

第六章

水產品中農藥、獸藥殘留的檢驗

1.1農藥、農藥殘留農藥是指用于預防、消滅或者控制危害農業、林業的病、蟲、草和其他有害生物以及有目的地調節植物、昆蟲生長的化學合成或來源于食物、其他天然物質的一種物質或者幾種物質的混合物及其制劑。

按用途可將農藥分為殺（昆）蟲劑、殺（真）菌劑、除草劑、殺蜻劑、殺鼠劑和植物生長調節劑等類型。其中最多的是殺蟲劑、殺菌劑和除草劑三大類。按化學組成及結構可將農藥分為有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯、有機氯、有機砷、有機汞等類型。

1.2獸藥、獸藥殘留

獸藥是指用于預防、治療、診斷動物疾病或者有目的地調節動物生理機能的物質（含藥物飼料添加劑），主要包括：血清制品、疫苗、診斷制品、微生態制品、中藥材、中成藥、化學藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及外用殺蟲劑、消毒劑等。根據食品獸藥殘留立法委員會（CCRVDF)的定義，獸藥殘留是指動物產品的任何可食部分所含藥物的母體化合物及（或）其代謝物，以及與藥物有關的雜質的殘留。所以藥物殘留既包括原藥，也包括藥物在動物體內的代謝產物。此外，藥物或其代謝產物還能與內源大分子共價結合，形成結合殘留，它們對靶動物具有潛在毒性作用。水產品中主要殘留藥物有哇諾酮類、抗生素類、磺胺類和峽喃類以及某些激素等。

1.3水產品中農藥和獸藥污染的來源和途徑導致水產品藥物殘留的主要原因如下：（1）使用未經批準的藥物或禁止使用的藥物（2）不正確使用或濫用藥物（3）未能遵守有關藥物休藥期（4）水產品及其制品加工時受到藥物污染或儲藏、運輸方法不當造成藥殘（5）生態、生產環境的污染

2.1有機氯農藥的檢測方法有機氯農藥（OCPs）是具有殺蟲活性的氯代烴的總稱，其代表性的品種包括六六六、DDT及其類似物和環戊二烯衍生物，它們均為神經毒性物質。

由于它們在物理化學性質上均具有較高的化學穩定性和極低的水溶性、在正常環境中不易分解、有很強的親脂性、易通過食物鏈在生物體脂肪中富集和積累，可導致殘留污染嚴重、害蟲的抗性增加。

水產品中有機氯農藥殘留量的測定原理試樣經提取、凈化、濃縮、定容，用毛細管柱氣相色譜分離，電子捕獲檢測器檢測，以保留時間定性，外標法定量。出峰順序：α-HCH、β-HCH、γ-HCH、五氯硝基苯、δ-HCH、七氯、艾氏劑、除蜻酯、環氧七氯、殺瞞酯、狄氏劑、pp’-DDE、pp’-DDD、op’-DDT、pp’-DDT、胺菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、α-氰戊菊酯、澳氰菊酯。標準溶液的配制分別準確稱取所需的標準品，用少量苯溶解，再用正己烷稀釋成一定濃度的儲備液。根據各農藥在儀器上的響應情況，以正己烷配制混合標準應用液。色譜條件

色譜柱：涂以OV-1010.25μm×30m×0.32mm（內徑）石英彈性毛細管柱。

程序升溫：60℃維持1min；40℃/min升到170℃；2℃/min升到235℃；40℃/min升到280℃，維持l0min。

進樣口溫度：270℃。

檢測器：電子捕獲檢測器（ECD），300℃。

載氣流速：氮氣（N2）：1mL/min；尾吹：50mL/min。

測定方法

（1）提取

稱取試樣20g（精確到0.0lg）于100mL具塞三角瓶中，加水6mL,丙酮40mL,振搖30min，加氯化鈉6g，充分搖勻，再加30mL石油醚，振搖30min。取35mL上清液，經無水硫酸鈉濾于旋轉蒸發瓶中，濃縮至約1mL，加2mL乙酸乙酯－環己烷（1＋1）溶液再濃縮，如此重復3次，濃縮至約1mL。（2）凈化

將此濃縮液經凝膠柱以乙酸乙酯-環己烷（1+1）溶液洗脫，棄去0mL～

35mL流分，收集35mL～

70mL流分。將其旋轉蒸發濃縮至約1mL，再經凝膠柱凈化收集35mL～70mL流分，蒸發濃縮，用氮氣吹除溶劑，以石油醚定容至1mL，留待GC分析。

結果計算X——試樣中各農藥的含量，單位為mg/kg;m1——被測樣液中各農藥的含量，單位為ng;m——試樣質量，單位為g;V1——試樣進樣體積，單位為μL；V2——試樣最后定容體積，單位為mL。2.2水產品中有機磷農藥殘留量的測定原理試樣經提取、凈化、濃縮、定容，用毛細管柱氣相色譜分離，火焰光度檢測器檢測，以保留時間定性，外標法定量。出峰順序：甲胺磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷、久效磷、樂果、乙拌磷、甲基對硫磷、殺蟆螟硫磷、甲基嘧啶磷、馬拉硫磷、倍硫磷、對硫磷、乙硫磷。標準溶液的配制

準確稱取各有機磷農藥標準品，用乙酸乙酯溶解、定容成一定濃度的儲備液。測定前，用乙酸乙酯稀釋配制混合標準應用液。色譜條件色譜柱：涂以SE-540.25μm×30m×0.32mm（內徑）石英彈性毛細管柱。程序升溫：60℃維持1min：40℃/min升到110℃；5℃/min升到235℃；40℃/min升到265℃進樣口溫度：270℃。檢測器：火焰光度檢測器（FPD-P）。載氣流速：氮氣（N2）：1mL/min;尾吹：50mL/min；氫氣：50mL/min；空氣：500mL/min

測定方法提取稱取試樣20g（精確到0.01g）于100mL具塞三角瓶中，加水6mL，丙酮40mL，振搖30mi云，加氯化鈉6g，充分搖勻，再加30mL石油醚，振搖30min。取35mL上清液，經無水硫酸鈉濾于旋轉蒸發瓶中，濃縮至約1mL，加2mL乙酸乙酯-環己烷（1＋1）溶液再濃縮，如此重復3次，濃縮至約1mL

。凈化將此濃縮液經凝膠柱以乙酸乙酯-環己烷（1＋1）溶液洗脫，棄去0mL～35mL流分，收集35mL～70mL流分。將其旋轉蒸發濃縮至約1mL，再經凝膠柱凈化收集35mL～70mL流分，蒸發濃縮，用氮氣吹除溶劑，以石油醚定容至1mL，留待GC分析。

水產品中多氯聯苯的測定多氯聯苯（PCBs），又稱氯化聯苯，是由一些氯置換聯苯分子中的氫原子而形成的化合物，在工業上得到廣泛應用。

多氯聯苯可以通過水體中生物食物鏈的富集作用，其在魚類體內濃度累積到幾萬甚至幾十萬倍。多氯苯同時損害人類的免疫系統并被列為可能的致癌物質，其毒性主要表現為：影響皮膚、神經、肝臟，破壞鈣的代謝，導致骨骼、牙齒的損害，并有慢性致癌和致遺傳變異等的可能性。含PCBs分析物的現有前處理方法（1）液-液萃取法又叫溶劑萃取法，該方法要求的設備簡單，操作快速，尤其是分離效果較好，但工作量大，且所用溶劑常是易揮發、易燃和有毒性，在實際應用中受到限制。（2）固相萃取法該法是較新也是當今最為廣泛應用的萃取方法之一。其主要是利用萃取劑的固體吸附作用從樣品中萃取分析物。在用固相萃取法處理含PCBs基質時，聚亞安酯作萃取劑的研究最為廣泛。該法操作較簡單，靈敏度、回收率較高，缺點是易發生堵漏、溝流等現象，所需樣品量大。（3）超聲波萃取法該方法是分析固體基質最簡單的技術之一，其原理是在室溫下用適當的有機溶劑和樣品混合，超聲萃取待測物質。萃取效率除與溶劑的極性有關外，還受萃取時間的影響。該法操作簡單。

（4）酸堿處理萃取法有實驗表明，在萃取混合液中加入有反應性的酸、堿或經酸堿處理過后的硅膠可明顯地改善萃取效果，提高萃取回收率。Liang等曾在液-液萃取中加入HCI，研究了不同酸性對PCDDs/PCDFs/PCBs回收率的影響，結果表明，前兩者在堿性條件下的回收率高，而后者則在酸性條件下的回收率高。（5）蒸汽相萃取法（Bleidner法）Schuphan等利用“Bleidner”蒸汽相萃取技術分析湖泊沉積物中的PCBs和有機氯沉淀物，與傳統的索氏抽提法相比較，結果表明，該法無需干燥和一般的清洗步驟，因而可大大縮短分析時間。但隨著PCBs氯化度的增高，使用該法所得的回收率明顯降低（由PCB28的98%下降到PCB180的43%）。（6)索氏抽提法在分析非極性和中等極性痕量有機物方面得到廣泛應用，在分析PCBs方面的報道也有很多，如沉積物、土壤和動植物組織等。該法的要點是溶劑的極性應與溶質的溶解度相符，并且萃取前要用溶劑將基質完全浸濕，其不足之處在于干燥過程耗時長，另外萃取時硫也易從基質中萃取出來，影響檢測器的測定，延長分析時間。PCBs的現有檢測方法氣相色譜法（GC）

氣相色譜法是目前分析PCBs常用的有效方法，一方面是因為它具有高分離能力、高靈敏度和高分析速度等優點；另一方面是由于一般樣品中所含的PCBs大都是痕量級水平。

所用的檢測器主要有以下幾類：

電子俘獲檢測器（ECD）ECD是分析痕量電負性有機化合物最有效的檢測器，具有選擇性較好、靈敏度高、檢測限低、易于操作和維修等特點。質譜檢測器（MS）MS具有很強的結構鑒定能力，與GC結合，充分利用各自的優點可以實現高效、快速的分離鑒定。MS法是一種先將分子離解成不同帶電荷的離子，然后對離子質量的強度進行檢測，從而獲得分子結構信息的方法。

薄層層析法（TLC）

高效液相色譜法（HPLC）HPLC應用于PCBs的分析相對較少，且主要是作為GC定性分析前以除去樣品中的廢物和油污的一種凈化方法。HPLC的優點是分析速度快、方便，可用于日常分析，不足是其常用的UV檢測器靈敏度低、選擇性差。

超臨界流體色譜法（SFC）氣相色譜法測定水產品中多氯聯苯殘留量利用消化法破壞水產品中的蛋白質和脂肪等雜質，用石油醚提取、濃硫酸磺化凈化，用毛細管氣相色譜法測定。

本方法簡便、快速，結果準確，適用于大批量樣品分析。

測定多氯聯苯中有代表性的六種：

PCB28-2,4,4′-Trchlorbiphenyl；

PCB52-2,2′,5,5’-Tetrachlorbiphenyl；

PCB101-2,2′,4,5,5′-Pentachlorbiphenyl；

PCB138-2,2′,3,4,4′,5′-Hexachlorbiphenyl；

PCB153-2,2′,4,4′,5,5′-Hexachlorbiphenyl；

PCB180-2,2′,3,4,4′,5,5′-Heptachlorhiplienyl。原理

試樣經高氯酸與冰乙酸的混合溶液消化，破壞樣品中蛋白質和脂肪等基體物質，進行初步凈化，用石油醚提取多氯聯苯殘留物，再用硫酸進一步凈化，濃縮，用具有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定，外標法定量。

試劑

所有試劑在多氯聯苯出峰處應無干擾峰，有機溶劑最好選擇優級純或色譜純試劑，分析純試劑應重蒸。石油醚（沸程30～60℃，于全玻璃蒸餾器中重蒸）；高氯酸；冰乙酸；濃硫酸；無水硫酸鈉（經550℃高溫灼燒3小時，干燥器中貯存）；硫酸鈉溶液（20g/L)，以上試劑均為分析純。多氯聯苯標準溶液：取10.0ng/μL的多氯聯苯標準溶液，用己烷稀釋成0.2nng/μL的標準使用液。色譜條件(1)色譜柱：DB-1701石英毛細管柱（或與之相當的色譜柱），30m×0.32mm×0·25μm(2)載氣：氮氣，線速度24cm/s(3)進樣口：溫度235℃，無分流方式進樣。(4)溫度程序：初始柱溫100℃，維持1min；59℃/min升至200℃，維持l0min；5℃/min升至240℃，維持15min，確保所有的樣品已經流出(5)檢測器：溫度300℃，補充氣流量60mL(6)進樣量：1μL(7)檢測器：63Ni電子捕獲檢測器。測定步驟

（1）樣品預處理魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉；蝦去頭、去殼、去附肢，取可食肌肉部分；蟹、甲魚等取可食肌肉部分；樣品切為不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小塊后混勻，放置冰箱備用。

（2）提取將樣品解凍，勻漿機勻漿后，稱取樣品5g（精確到0.001g)，置于100mL具塞三角燒瓶中，加入50mL高氯酸與冰乙酸的混合溶液（體積比1︰1），于70℃恒溫水浴中振蕩約2h，至樣品消化完全。將溶液轉移至250mL分液漏